胱硫醚β合成酶在酒精性肝病发病机理中的作用的实验研究.pdfVIP

目 录 中文摘要…………………………………………………………………．1 英文摘要…………………………………………………………………．4 研究论文胱硫醚13合成酶在酒精性肝病发病机理中的作用的实验研究 前言………………………………………………………………………8一日U吾 ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．…．．．．．．．．．． 材料与方法……………………………………………………………’8 结果 ……………………………………………………………………．．12 附图 …………………………………………………………………14 附表…………………………………………………………………26 讨论……………………………………………………………………．．29 结论……………………………………………………………………．．34 参考文献……………………………………………………………．34 综述高同型半胱氨酸血症与酒精性肝病………………………………．37 致谢…………………………………………………．．………………………．．．56 个人简历……………………………………………………………………．．57 中文摘要 胱硫醚13合成酶在酒精性肝病发病机理中 的作用的实验研究 摘 要 liver 目的：酒精性肝病(alcoholic 致的肝脏损害性病变，其病理改变包括酒精性脂肪肝、酒精性脂肪性肝炎、 酒精性肝纤维化及酒精性肝硬化。关于ALD的发病机理目前尚不清楚， 近年来有人提出以氧化应激和脂质过氧化为中心的“二次打击”假说，“第 一次打击使脂类沉积在肝细胞，导致脂肪肝，“第二次打击’’涉及内毒 环境的变化。当内质网内环境改变，细胞就会激活信号应对这些改变，并 且重新恢复折叠蛋白的环境，内质网的这种改变就是内质网应激 reticulum (endoplasmic Protein 叠蛋白反应(Unfolded 未折叠或错误折叠蛋白积聚所致，适宜的应激有利于细胞内环境的恢复， 然而严重而持久的内质网应激将导致细胞凋亡。肝细胞具有高度发达的内 质网，是对内质网应激最敏感的细胞之一，目前的研究也表明在细胞和动 物模型中，内质网应激参与了酒精性肝病的发病过程。葡萄糖调节蛋白．78 (glucose．regulated 热休克蛋白70具有同源性，是存在于内质网上最多的伴侣蛋白，是内质 网应激反应的标志性分子，并且具有保护细胞、对抗细胞凋亡的作用。胱 硫醚D合成酶(cystathionine 生素B6为辅助因子，与丝氨酸结合形成胱硫醚，进一步形成半胱氨酸和 a-酮丁酸。Hhcy使内质网内错误折叠的蛋白增加，而诱发内质网应激， 激活非折叠蛋白反应。本研究旨在应用酒精灌胃建立大鼠ALD模型，用 中文摘要 chain transcription．polymerase 及GRP-78 为有效防治ALD提供新的思路。 饲养1周后随机分出10只为正常对照组，其余动物采用逐渐增加酒精浓 等生化指标；取部分肝组织立即冰冻切片行苏丹Ⅳ染色，观察肝细胞脂变 性情况；另取肝组织固定于4％中性福尔马林溶液，石蜡包埋，51Jxn切片 天狼红染色观察肝组织纤维化程度：并用石蜡切片进行免疫组织化学染 色，观察肝组织GRP．78蛋白表达情况；余肝组织经液氮速冻后置于．80℃ 冰箱，用RT-PCR观察大鼠肝组织GRP．78mRNA的表达。 结果： 1血清肝功能指标的变化：随着造模时间的延长，血清—岍和AST 2血清血脂指标的变化：随着造模时间的延长，血清TG、TC、LDL、 或P0．01。 3肝组织病理学改变：4周大鼠肝细胞出现小叶中央静脉周围肝细胞 脂肪变性，随着造模时间的延长，肝细胞脂肪变性逐渐加重，肝小叶内坏 死灶明显增多和纤维