硫酸镍对小鼠精原细胞毒作用的实验研究.pdfVIP

硫酸镍对小鼠精原细胞毒作用的实验研究 摘要 目的初步建立小鼠精原细胞体外分离、纯化及培养的实验方法，并探讨硫 酸镍对小鼠精原细胞的毒作用。 方法选择健康昆明种6～8天雄性小鼠，摘取睾丸组织，采用组合酶消化法 制备小鼠睾丸细胞悬液，Percoll不连续密度梯度法分离精原细胞，贴壁培养进 一步纯化精原细胞，用碱性磷酸酶染色鉴定。分离纯化的精原细胞继续培养，至 ll 生长状态良好时，用25、50、100、200、400、800mol／L硫酸镍染毒，以染毒 精原细胞的毒作用；采用透射电镜观察硫酸镍染毒后精原细胞超微结构的变化。 结果用组合酶消化和Percoll不连续密度梯度法，分离6-8dd、鼠的精原细 胞，可以获得纯度较高、基本满足体外实验要求的精原细胞；M1vr结果显示，随 着染毒浓度的增加和染毒时间的延长，100弘mol／I镍染毒6h细胞生长抑制(／2 II 镍染毒6h细胞溶解液LDH活力开始降低(／20．05)，并呈现出剂量依赖性和时间依 赖性；透射电镜可见，精原细胞的超微结构发生了变化，随着染毒剂量和染毒时 间的延长，出现细胞皱缩，细胞膜破裂，大量内容物外溢，细胞器严重破坏，结 构难以辨认，胞浆出现大量空泡。 结论用组合酶消化法和Percoll不连续密度梯度法，分离6-8dt]、鼠的精原细 胞能满足体外实验的需要，且硫酸镍对小鼠精原细胞具有一定的毒作用。 关键词精原细胞；分离；纯化：体外培养；小鼠；硫酸镍；细胞毒 on induced Experimentalstudyspermatogonia cytotoxicity nickelsulfateinmice by Abstract To establish methodsof isolation，cultivation Objective experimentalspermatogonia and in to vitroinorder induced purification explorespermatogoniacytotoxicityby nickelsulfateinmice． Methods Toselectthe malemiceofbirth08dandsterilize healthyKunminggenera with 70％ethanol removemicetestesand cell thoroughly,then preparesingle withthemethodsofcombination and suspension enzymatic percoll digestion discontinuous ofadherentculturewasusedto densitygradient．The technique purify furtherdetermine withalkaline cells，and spermatogonia