甘蓝型油菜fad2基因的RNA干扰及转基因植株的获得.pdfVIP

嫠捌盔堂2Q盟生受±堂焦监塞 苴蕉型迪墓盘丝基因数壁△坠王拨厘筮基固撞挂鲍苤堡 载体连接、转化后，挑单克隆菌系用于测序。测序结果与NCBI公布的序列比较，结 果表明：所克隆的五个片段序列与其参考序列完全相同，同时表明，采用以总DNA 为模板PCR扩增丘d2．1、丘d2．2这两个片段是可行的。并且与已发表的甘蓝型油菜 如以基因编码区序列的同源性达到90％以上，表明用本实验克隆的fad2片段构建的 ihpRNA植物表达载体，有可能诱导甘蓝型油菜faa2基因沉默。 RNAi植物表达载体的构建 2．faa2 基因片段(510bp)分别以反向和正向的形式插入到合适启动子下游，并在反向和正向 剪切位点之前5bp、之后4bp片段。启动子选用油菜Napin启动子，可以充分保证其 表达的时空特异性与靶基因相同：终止子为来源于pCAMBIAl301质粒的、具有高效 终止功能的CaMV3’UTR序列。 RNA干扰体基因转化甘蓝型油菜 3．根癌农杆菌介导的faa2 利用根癌农杆菌介导法，对甘蓝型油菜高芥酸品系Y1舢1和双低品系R02的带 柄子叶进行fad2RNA干扰体基因的转化、筛选，生根，移栽，获得了83株转化Y14．1 红外谷物品质分析仪，对收获的T1代种子样品进行光谱扫描，测定了油菜油脂中芥 酸、油酸、亚油酸等脂肪酸含量。初步结果表明：侵染转化高芥酸品种Y14．1后获得 的转基因油菜种子，其中芥酸的含量与对照相比有所升高，而棕榈酸、硬脂酸、油酸、 亚油酸、亚麻酸基本上均比对照有所降低。这说明利用RNAi干扰丘以基因可以使 高芥酸油菜品种的芥酸在理论值范围内有所升高，从而获得期望的高芥酸品种。由于 所收获得T1代种子成熟度不够，脂肪酸总量比正常值低，所以还需要对1r2代种子 重新进行脂肪酸含量检测，期望得出更为准确的分析结果，为在不久的将来培育出高 芥酸油菜打好基础。 关键词；高芥酸：高油酸；fad2；ihpRNA；农杆菌介导 II 塑捌盔堂2鲤2生亟±堂焦j金毫 苴堇型迪苤＆丝基因鲍坠△王这巫整基囚撞挂趋瑟馒 PlantofBrassica ObtainingTransgenic napus RNA Interference by offad2gene Abstract In recent onmolecularaboutfatmetabolismrelated years，thede印study biology gene andthe andso the separation,cloneorgan Oil，hasopenedpossibility specificitypromoter to seed and the changerape pathwaysimproverapequalityusinggeneengineering．From acid seethattheoleicacidisan metabolism chain,we fatty biosynthesismay important in acid can the acid and branchin