6-BA 对豆子叶节再生的影响.docVIP

6-BA 对大豆子叶节再生的影响 摘?? 要: 以大豆品种黑农35 的子叶节为材料, 研究6-BA 对子叶节再生三个阶段即无菌苗萌发、丛生芽诱 导、丛生芽伸长的影响。结果表明: 添加1mg??L 6-BA 的萌发培养基上萌发的无菌苗适合作为外植体的 来源; 丛生芽诱导培养基中6-BA 的最适浓度为1??7mg??L; 丛生芽伸长的四因素正交试验表明丛生芽诱导 阶段的继代培养基中降低6-BA 的浓度对其伸长的影响效应最大, 水平为继代培养基中0??34mg??L 6-BA 浓度, 为原来的1??5。 关键词: 大豆; 子叶节; 6-BA; 丛生芽; 再生系统 1 ?? 材料与方法 1??1 ?? 材料 1??1??1 ?? 植物材料?? 大豆品种黑农35, 由东北农业大学 大豆研究所提供。 1??1??2 ?? 培养基?? 萌发基本培养基和丛生芽诱导基本 培养基: B5 盐, MS 铁盐, B5 有机, 3% 蔗糖, 0??8% 琼脂 粉, pH 5??8; 继代芽诱导培养基: 6-BA 浓度降为0??85、 0??34 和0??17mg??L, 其他同丛生芽诱导培养基; 丛生芽 伸长基本培养基: MS 盐, MS 铁盐, B5 有机, 0??1mg??L IAA, 10mg??L 硝酸银, 3%蔗糖, 0??8%琼脂粉, pH 5??8。 1??2 ?? 方法 1??2??1 ?? 无菌苗的萌发?? 挑选健康无病害的大豆种子 进行氯气消毒处理后, 接种于萌发培养基上, 6-BA 设0 和1??0mg??L 两个浓度, 3 次重复, 取萌发5~ 7d 的无菌 苗, 将两片子叶从子叶节处纵向切开, 用解剖刀切去萌 发的顶芽和侧芽, 每粒种子获得两个子叶节外植体, 外 植体诱导14d 后统计每个处理的分化率和芽数。 1??2??2 ?? 丛生芽的诱导?? 将子叶节按近轴面朝上插入 芽诱导培养基中, 培养基中添加的6-BA 设为1??5、1??6、 1??7、1??8、1??9、2??0mg??L 6 个浓度梯度, 3 次重复, 14d 后 统计每个处理的分化率和每个外植体的芽数。 1??2??3 ?? 丛生芽的伸长?? 待丛生芽可见时, 将外植体转 入芽伸长培养基中, 对影响丛生芽伸长的主要因素继 代芽诱导培养基中6-BA 浓度( A) 、芽伸长培养基中谷 氨酸( Glu) 浓度( B) 、芽伸长培养基中GA3 浓度( C) 、芽 伸长培养基中玉米素( ZT) 浓度( D) 及3 个水平进行 L934 正交试验, 各因素的水平见表1。转接时切去子 叶以及下胚轴基部的老化组织, 每10d 继代1 次。 表1 ?? 影响丛生芽伸长的因素水平表 Table 1 ?? Factors and levels influencing multiple shoots elongation (mg??L) 水平 levels 继代芽诱导 培养基中6- BA 浓度 (A 因素) 6- BA in 2nd SIM( A factor) 芽伸长培养基 中Glu 浓度 ( B 因素) Glu in SEM ( B factor) 芽伸长培养基 中GA3 浓度 ( C 因素) GA3 in SEM ( C factor) 芽伸长培养基 中ZT 浓度 ( D 因素) ZT in SEM (D factor) 1 0??85 0 0??0 0??5 2 0??34 50 0??5 1??0 3 0??17 100 1??0 1??5 Not e: SIM means Shoot s Induct ion Medium; SEM means Shoots Elongat ion Medium 1??2??4 ?? 统计分析方法?? 使用软件SAS 8??2 对试验数 据进行分析。 2 ?? 结果与分析 2??1 ?? 萌发培养基中6-BA 对丛生芽分化的影响 由图1 可见, 添加6-BA 的萌发培养基上萌发的无 菌苗子叶节区及下胚轴相对粗大, 比较幼嫩, 与未添加 6-BA 的相比, 同样苗龄没有须根的出现, 顶芽也没有 延伸到超过子叶的长度。图2 为添加6-BA 的萌发培 养基上萌发的无菌苗获得的大豆子叶节诱导的丛生 芽, 可见, 这样的无菌苗子叶节处分生细胞生长旺盛, 适合作为外植体的来源。从表2 可以看出, 添加6-BA 的萌发培养基分化率显著高于未添加6-BA, 并能提高 每个外植体的芽数从3??09 到5??76 个。 图1 ?? 6-BA 对无菌苗萌发的外观影响 Fig. 1 ?? Appearance effect of 6-BA on germinat ion of seedling A 和B 分别为添加0 和1??0 mg??l 6-BA 的