riboMONITOR转染指示剂使用说明.PDFVIP

riboMONITOR™ 转染指示剂使用说明 RN ：R10036.4 产品简介 riboMONITOR™转染指示剂是一种细胞核富集的核酸转染指示剂，能够通过转染方式进入细胞核，结合两种染料，即可精确定量分析转染试 剂的转染效率及细胞毒性。riboMONITOR™转染指示剂试剂盒适用于检测各种核酸的转染效率，如脂质体，聚合物，电转等。 表1 试剂盒组分信息 riboMONITOR™ Transfection Indicator Kit (Green) Concentration C10410-1 C10410-5 Storage riboTRACER™ Fluorescent Oligo(Green) N/A 1nmol 5nmol DEADstain™ Dye (Red) 100X 200μl 1000μl 4℃避光 NUCLEOstain™ Dye (Blue) 100X 200μl 1000μl 运输保存 室温运输，按照适当条件储存，可以稳定储存一年。 使用方法 使用前须知 1 ）将riboTRACER™ Fluorescent Oligo(Green)加入适量灭菌 RNase-free Water ，配置成20μM 存储液，-20℃分装保存。 表2 20μM 储存液的配置参考 riboTRACER™ Fluorescent Oligo (Green) 1nmol 5nmol RNase-free Water 50μl 250μl 注：1 ）配置时需要避光操作；2 ）分装保存时宜采用无菌无酶棕色冻存管。 2 ） 为避免外界因素（包括酶，极端 pH 或者温度等）导致产品降解，请在实验过程中将 riboTRACER™ Fluorescent Oligo (Green) 于冰上 放置，使用完毕后于-20℃~-80℃小心保存。 1. 转染浓度： 锐博生物推荐的初始转染浓度为100nM ，转染后24h检测。由于细胞类型及转染试剂的差别，转染浓度进一步调整优化。 2. 操作步骤 ： riboTRACER™转染 DEADstain™和 NUCLEOstain™染色 荧光检测与分析 以riboFECT™ CP作为转染试剂，于24孔板转染，转染浓度为 100nM为例。其他转染浓度及培养容器转染请参考表2。 1 ）接种细胞 5 5 a. 贴壁细胞：以Hela细胞为例，接种1×10 ~5×10 个细胞至含有适量完全培养基（v1 ）的24孔板培养孔中，使转染时的细胞密度能够达到30~50%。 5 5 b. 悬浮细胞：以THP1细胞为例，接种1×10 ~5×10 个细胞至含有适量完全培养基（v1 ）的24孔板培养孔中。 注：1 ）不同细胞生长速度不同，接种细胞的数量，细胞密度需要依据细胞类型，培养时间，实验目的而定；2 ）每孔接种的细胞数量应尽量相同，使细胞均匀分布。 2 ）转染riboTRACER™ （避光） 对于每个转染样品，请按以下步骤准备 riboTRACER™-riboFECT™ CP 混合液： a. 稀释 riboTRACER™ ：用30μl 1X riboFECT™ CP Buffer(v2)稀释 2.5μl 20μM 的 riboTRACER™ Fluorescent Oligo (Green) 储存液(v3) ，轻轻