基因工程复习（校对版）.docVIP

一、名词解释 ⒈同裂酶(isoschizomer)：有些不同微生物来源的酶，能识别相同的序列，切割方式相同或不同，其中识别位点与切割位点均相同的不同来源的酶。 ⒉基因工程（genetic engineering）：是在分子水平上进行的遗传操作，指将一种或多种生物体（供体）的基因或基因组提取出来，或者人工合成基因，按照人们的愿望，进行严密的设计，经过体外加工重组，转移到另一种生物体（受体）的细胞内，使之能在受体细胞遗传并获得遗传性状的技术。 ⒊Transform： 转化（transformation）：把以质粒为载体的重组DNA分子引入受体细胞的过程叫做转化。 转染（transfection）：把以噬菌体或病毒为载体的重组DNA分子引入受体细胞的过程叫做转染。 ⒋扣除杂交（subtractive hybridization）：又叫扣除cDNA克隆（subtractive cDNA cloning）它是通过构建扣除文库得以实现的。 ⒌Southern blotting（Southern印迹杂交技术）：根据毛细管作用的原理，使在电泳凝胶中分离的DNA经转膜后与DNA探针杂交以检测这些被杂交的DNA片段的实验方法。 ⒍DNA连接酶（ligase）：能够催化在两条DNA链之间形成磷酸二脂键的酶。 ⒎多克隆位点（MSC）：DNA载体序列上人工合成的一段序列，含有多个限制内切酶识别位点。能为外源DNA提供多种可插入的位置或插入方案。 ⒏载体（vectoe）：是指基因工程中携带外源基因进入受体细胞的“运载工具”，他的本质是DNA复制子。 ⒐同尾酶（isocaudamer）：有一些限制性内切酶，他们来源各异，识别序列也各不相同，但切割后产生相同的粘性末端，特称之为同尾酶。 ⒑感受态：受体细胞处于易接受外源DNA转化时的生理状态。 感受细胞：就是受体细胞处于摄入外源DNA的状态。 ⒒DNA文库（基因文库）：是通过克隆方法保存在适当宿主中的某种生物、组织、器官或细胞类型的所有DNA片段而构成的克隆集合体。 基因组文库（genomic library）：是指将某生物的全部基因组DNA切割成一定长度的DNA片段克隆到某种载体上形成的集合。 cDNA文库（cDNA library）：从一定生长阶段或条件的某种细胞分离到的全部mRNA经反转录成cDNA后再重组和增殖所产生的天性繁殖系的总和。 ⒓载体（vectoe）：是指基因工程中携带外源基因进入受体细胞的“运载工具”，他的本质是DNA复制子。 ⒔限制性内切酶（restriction endonuclease）：识别并切割特异的双链DNA序列的一种内切核酸酶。 ⒕基因芯片（gene chips）：是指采用原位合成或直接点样的方法将大量DNA片段或寡核苷酸片段以预先设计的方式排列在硅片、玻璃等介质上形成微矩阵，待检样品用荧光分子标记后，与微矩阵杂交，通过荧光扫描及计算机分析即可获得样品中大量的基因序列及表达信息，以达到快速、高效、高通量地分析生物信息的目的。 ⒖分子标记（molecular marker）： 广义的分子标记是指可遗传的并可检测的DNA序列或蛋白。狭义的分子标记只是指DNA标记，而这个界定现在被广泛采纳。 ⒗转化（transformation）：把以质粒为载体的重组DNA分子引入受体细胞的过程叫做转化。 转染（transfection）：把以噬菌体或病毒为载体的重组DNA分子引入受体细胞的过程叫做转染。 二、填空题 ⒈核酸提取的一般步骤包括细胞破碎、除去与核酸结合的蛋白质及多糖脂等杂质、除去其它杂质核酸获得均一样品。 ⒉目前发现的限制性内切酶可以分为 三 类（Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型），其中对基因工程操作为之有用的酶是 Ⅱ 型酶。 ⒊基因工程的三大要素是供体、受体、载体。 ⒋碱性磷酸酶的主要作用是5末端标记前处理，去除DNA片段的5 ，一般我们需要利用碱性磷酸酶处理线性载体，以达到所需效果。 ⒌核酸纯化的目的是 、 、 。 ⒍一般连接反应发生的折衷温度为16℃（10~20℃）。 ⒎受体细胞的感受态是指受体细胞处于易接受外源DNA转化时的生理状态。 ⒏DNA片段的体外连接一般包括2种连接方式，其中粘性末端连接是最易的。 ⒐质粒的空间构型有三种闭合环状DNA、开环DNA、线性DNA，在凝胶电泳上跑的最快的是闭合环状DNA，最慢的是开环DNA。 ⒑PCR扩增需要模板分子、Primer、TqDNA聚合酶、dNTPs、buffer（Mg2+）。 ⒒理想的质粒克隆载体必须具备的基本条件，如具有复制起点、具有抗菌素抗性基因、具有若干限制性内切酶单一识别位点、具有较小的分子量和较高的拷贝数。 三、不定向选择题 ⒈在DNA的提取过程中，常用的沉淀DNA