基因工程重点题目整理.docVIP

1.就克隆一个基因(DNA 片段)来说，最简单的质粒载体也必需包括三个部分：复制区 ；选择标记 ；克隆位点另外，一个理想的质粒载体必须具有低分子量。 为了防止 DNA的自身环化，可用脱去双链 3. λ 噬菌体的基因组 DNA为 kb，有 多个基因。在体内，它有两种复制方式，扩增时(早期复制)按 θ复制，成熟包装(晚期复制)则是按 滚环 复制。它有一个复制起点，进行 双 向 复制。λ 噬菌体的 DNA既可以以线性存在又可以环状形式存在，并且能够自然成环。其原因主要是在 λ 噬菌体线性 DNA分子的两端各有一个 12 个碱基组成的天然黏性末端。这种黏性末端可以自然成环。成环后的黏性末端部位就叫做 COS 位点。 受体细胞的感受态是 接受外源 DNA 的生理状态 5.DNA聚合酶 I的 Klenow大片段是用 切割DNA聚合酶 I得到的分子量76kDa 的大片段，具有两种酶活性： (1)→ 3’聚合酶的活性；(2)→5’核酸外切酶的活性。 黏粒(cosmid)是质粒—噬菌体杂合载体，它的复制子来自 质粒 、COS 位点序列来自 λ 噬菌体 ，最大的克隆片段达到 45 kb。 Mg2+ 离子，抑制核酸酶的活性。 8.Clark 发现用 Taq DNA 聚合酶得到的 PCR 反应产物不是平末端，而是有一个突出碱基末端的双链 DNA分子。根据这一发现设计了克隆 PCR 产物的 T载体 9.SSC 是由 NaCl 和柠檬酸钠组成的试剂，其中 NaCl 的作用是使 DNA 溶解 ，而柠檬酸钠的作用是作为螯合剂，抑制核酸酶的活性 10.基因克隆中三个基本要点是：克隆基因的类型；受体的选择；载体的选择(1)扩增 DNA； (2)获得基因产物；(3)研究基因表达调控；(4)改良生物的遗传性 12.基因工程中有 3 种主要类型的载体： 质粒DNA；病毒DNA；质粒和病毒DNA杂合体。严格地说限制性内切核酸酶(restriction endonuclease)是指已被证明是 限制—修饰系统的一个组成部分 的酶。基因工程中把那些具有识别 双链 DNA 分子中的某种特定核苷酸序列 并由此切割 DNA 双链结构 的内切核酸酶统称为限制性内切核酸酶。 反向转录酶除具有以 DNA 和 RNA为模板合成 DNA 的 5’→ 3’合成酶的活性外，还具有4 种酶的活性： →3’外切核酸酶活性；(2)3’→5’外切核酸酶活性；(3)DNA 内切核酸酶的活性(Mn2+，切割 SC DNA)； (4)解旋酶的活性 15.部分酶切可采取的措施有：(1)减少酶量；(2)缩短反应时间；(3)增大反应体积 等。 产生平末端的方法通常有：(1)平切的酶； (2)S1 核酸酶切除黏性末端； (3)DNA 聚合酶补平黏末端。 穿梭载体(shuttle vector)：能够在 两类不同的宿主中复制、增殖和选择 的载体，主要是质粒，它们至少有两套复制单元和两套选择标记，相当于两个载体的联合。 完全的回文序列具有两个基本的特点，就是：(1) 能够在中间划一个对称轴，两侧的序列两两对称互补配对 (2) 两条互补链的5’ →3’的序列组成相同，即将一条链旋转180°，则两条链重叠 。按适当的顺序，列出将一种 mRNA的 cDNA 克隆到表达载体所用到的酶。 （分） 答： (1) 反转录酶以 mRNA 为模板合成单链 cDNA； (2) DNA 聚合酶以单链 cDNA为模板复制出双链 DNA； (3) 用限制性核酸内切酶切割载体； () 用 DNA连接酶将 cDNA 插入载体中。 PCR 的基本原理是什么?（分） 答： (1)PCR反应是模仿的DNA复制进行，耐热耐热→3’方向按与模板碱基互补配对原则进行聚合dNTP而延伸DNA链。 3、某一质粒载体具有 Tet r和 Kan r 的表型，在 Kan抗性基因内有一 Bgl I的切点。现用 Bgl I切割该载体进行基因克隆，问：(1)转化后涂皿时应加什么样的抗生素？(2)培养后长出的菌落具有什么样的抗性基因型？(3)如何利用抗性变化筛选到含有插入片段的重组体？（分） 答： (1)加四环素；(2)Tet r Kans 和 Tet r Kan r； (3)重新点种在含 TetKan的平板 和 只加 Tet 的平板上，选择只在 Tet 平板上生长的菌落，即为所的重组体。你打算扩增下图所示的两段序列之间的DNA，请在下列序列中选择合适的两条作为上、下游引物。（分）5’-GACCTGTGGAAGC------CATACGGGATTG- 3’3’-CTGGACACCTTCG--- ---GTATGCCCTAAC- 5’可供选择的序列：5’-CTGGACACCTTCG 5’