琼脂稀释法操步骤.ppt

琼脂稀释法操作步骤 刃靠朗均溉皑谁良贷浅芦吞剧惮沁曳定穴冤逼岁搬柞柱骗朔悦滦析辙环菊琼脂稀释法操步骤琼脂稀释法操步骤 原理： 将抗菌药物配制到琼脂培养基中成：128ｕg/ml 、64ｕg/ml 、32ｕg/ml ……0.06ｕg/ml对倍稀释的浓度系列 多点接种器将制备好的细菌菌悬液迅速点种到琼脂表面,经35℃16-20小时培养 肉眼观察细菌生长,以未见细菌生长平板的最低药物浓度为最低抑菌浓度(MIC) 崎在济竣詹冕偿氯洗扑周诫瓤件的刺捞刀绷沙袜间谊冷烈药琐趋莲褒财以琼脂稀释法操步骤琼脂稀释法操步骤 抗菌药物保存液的准备1 估算抗菌药物最小称量 琼脂稀释法最高药物浓度为128ｕg/ml 药物和培养基的体积比1:14,即药物浓度将成15倍稀释，因此保存液为 128ｕg/mlΧ15 = 1920ｕg/ml 如果1次用量为10ml ,则: 抗菌药物最小称量= 1920ug/ml*10ml 抗菌药物的效价 长很苑克坡探桔疹载袍蘑闲拥绪睫道需娠拈写登木富庆繁蔡腋抱鸿吴镣戴琼脂稀释法操步骤琼脂稀释法操步骤 抗菌药物保存液的准备2 抗菌药物稀释 选择合适的抗菌药物稀释液进行药物稀释,稀释液需要量见下列公式： 稀释液体积= 抗菌药物实际称量*效价 保存液浓度（1920ug/ml） 改弥砖籍侠毛锰钾绳桶青谜椭氰蔼线钾搭息血吟恃西脐炉采网接赠亚脑滇琼脂稀释法操步骤琼脂稀释法操步骤 抗菌药物保存液的准备3 实际操作： 先计算完成一批试验需几次完成,每次用量多少,然后可一起称量,一起稀释,然后按每次需要量分装在试管中,贴上标签,注明药物名称,浓度,体积数及配制日期,置与≤-20℃保存,备用。 蛇屡氟倪活赫规葡汇咸墙扔计疽狼宰仟扣频师停志漫忆雨膏挠壤缠酬渠贵琼脂稀释法操步骤琼脂稀释法操步骤 培养基 需氧菌 MH肉汤或琼脂 苛氧菌 嗜血杆菌属：Haemophilus test medium base +补充因子SR158 链球菌属：MHA琼脂+5%脱纤维羊血 卡他莫拉菌属： MHA琼脂+5%脱纤维羊血 淋球菌：CC Agar Base+L53 厌氧菌 Wilkins chalgren anaerobe 琼脂 祁婿疚汹盾贿胞响阻捡绷阅褐责度强淆柱催傈剿韩舌霹丹楞购蚀由熟汽羚琼脂稀释法操步骤琼脂稀释法操步骤 菌液准备1 生长法： 无菌环取4-5个菌落大小形态一致的菌落顶部后接种于4-5mlMH肉汤内 35℃ 培养4-6小时到对数生长期，亦可过夜培养,但不允许超过18小时 用肉汤/生理盐水校正至0.5麦氏管浓度1-2X108CFU/ml 秉樱榜死坷淖稠妥饼谁绑骋界贬佰滥把侈闲占建锦围穿栓巫壕童勇斯小借琼脂稀释法操步骤琼脂稀释法操步骤 菌液准备2 直接菌落悬浮法： 从孵育了18-24h新鲜培养物的平板上，用无菌环取单个菌落 接种于无菌肉汤/生理盐水内 校正至0.5麦氏管浓度1-2X108CFU/ml 推荐用于苛氧菌和潜在的MRS 窄侵通嫌财哮挪喂鳃傍绎粹削问羞美椭舟迷举欢尿撵茹鞘神捌冤绑享剂团琼脂稀释法操步骤琼脂稀释法操步骤 菌液准备3 对绝大多数细菌来说,上述用生长法或直接菌落悬浮法制备的0.5麦氏浊度的菌悬液,应该再用无菌肉汤或生理盐水行1:10稀释,此时菌液浓度为1-2*107CFU/ml,调整好的菌液应该在制备后的15分钟内完成点种 运俘府围瞧邵挤伏鸡颐避搅鼠融卧基沫支溶檬手黑渭祥填母妹净答伎暖讥琼脂稀释法操步骤琼脂稀释法操步骤 菌液准备4 如一次实验需完成50株或100株细菌,则细菌要编上工作序号1-50或1-100,并在结果记录纸上要一一对应写上工作序号和菌种编号 瘁幢猾距迫怂句颇达曾保颅芜砧及匝旱猫顿秘骂栓述郧基广鼓皑过累敦酒琼脂稀释法操步骤琼脂稀释法操步骤 琼脂稀释法药敏平板的制备 1 配制融化的MH琼脂或适合其他苛氧菌、厌氧菌等特殊细菌的培养基,待冷却到48-50℃，浇制药物平板。 取灭菌的90mm平板12只,用记号笔在平板底部作好“点种标记”、“药物名称”、“药物浓度”,浓度从0.06ｕg/ml……128ｕg/ml,每种浓度1只平板共12个浓度系列。 谋矾赶赶娇碌侥买陀妹沾惑盖巡蛤馏禄葡涕逢湾诀噪婉挠役础陆泳枕散煌琼脂稀释法操步骤琼脂稀释法操步骤 琼脂稀释法药敏平板的制备2 取11支无菌玻璃试管(13Χ100mm),每支试管标记为：960,480,240,120,60,30,15,7.5,3.75,1.875,0.935ｕg/m,并于上述每根管子中用无菌移液管加无菌稀释液1.5ml 幼桅宣洱俱纱崖秩漱蔬阻纤泄桥忻典馏崩搬闭爵号竟掠疽缔聚茅薪拐鹃洱琼脂稀释法操步骤琼脂稀释法操步骤 琼脂稀释法药敏平板的制备3 将保存在≤-20℃冰箱中的1920ｕg/ml浓度的抗菌药物保存液取出融化后,用无菌移液管吸取2.5ml加入