第三章液质联用原理及应用-2013.ppt

* * Example of Precursor Ion Spectrum 600 900 1200 1500 1800 m/z, amu 5 8 7 . 5 7 4 5 . 6 8 9 5 . 6 8 0 2 . 4 6 3 3 . 4 520.3 1105.0 1704.4 600 900 1200 1500 1800 m/z, amu 3.0e6 6.0e6 9.0e6 1.2e7 Intensity, cps 6 0 8 . 3 520.3 802.4 600 900 1200 1500 1800 m/z, amu 3.0e4 6.0e4 9.0e4 Intensity, cps Precursors of 86 (Ile/Leu) Q1 Scan 745.6 异亮氨酸(Ile)与亮氨酸(Leu) * * /masspec/elcomp.htm * * * * * * (a+b)n 当分子中含有n个卤素原子， 各种同位素相对丰度比为： 当分子中含有卤素氯、溴两种原子，则同位素相对丰度比为： (a+b)n·(c+d)m m、n为氯、溴原子的数目； a、b为氯原子轻、重同位素的天然丰度; c、d为溴原子轻、重同位素的天然丰度 * 六、如何看质谱图 (1)确定分子离子，即确定分子量 氮规则：含偶数个氮原子的分子，其质量数是偶数，含奇数个氮原子的分子，其质量数是奇数。与高质量碎片离子有合理的质量差，凡质量差在3~8和10~13，21~25之间均不可能，则说明是碎片或杂质。 * (2)确定元素组成，即确定分子式或碎片化学式 高分辨质谱可以由分子量直接计算出化合物的元素组成从而推出分子式 低分辨质谱利用元素的同位素丰度，例: * * (3)峰强度与结构的关系 丰度大反映离子结构稳定 在元素周期表中自上而下，从右至左，杂原子外层未成键电子越易被电离，容纳正电荷能力越强，含支链的地方易断，这同有机化学基本一致，总是在分子最薄弱的地方断裂。 * * 七、质谱解析的一般步骤 (适于低分辨小分子谱图，若已经是高分辨质谱图得到元素组成更好) (1)核对获得的谱图，扣除本底等因素引起的失真,考虑操作条件是否适当 (2)综合样品其他知识：例如熔点，沸点，溶解性等理化性质，样品来源，光谱，波谱数据等. * * (3) 尽可能判断出分子离子。 (4) 假设和排列可能的结构归属：高质量离子所显示的，在裂解中失去的中性碎片，如M-1，M-15，M-18，M-20，M-31......意味着失H，CH3，H2O，HF，OCH3...... (5)假设一个分子结构，与已知参考谱图对照，或取类似的化合物，并作出它的质谱进行对比。 * 液相色谱质谱联用 * + + 样品与溶剂脱 离及电离 EI ESI APCI LC/MS 接口 离子源 质量分析器 检测离子 HPLC 数据系统 质谱 离子识别 Quadrapole Time of Flight Fourier Transform … + + + + + + + 离子检测 + + - + + + + + + - + + + 一、LC/MS 系统构成 * 二、LC/MS 数据形式 TIC 色谱 m/z 100 150 200 250 300 350 91 107 123 145 175 191 323 79 201 341 402 384 366 M -18 M + M -36 M -79 M -162 241 保留时间 TIC 蟾蜍他灵 * LC/PDA = 254 nm LC/MS = 228 m/z LC/MS = 162 m/z LC/MS = 198 m/z LC/MS 数据形式 * LC/MS 数据形式 * 三、LC-MS分析条件的选择和优化 1.接口的选择： ESI适合于中等极性到强极性的化合物分子，特别是那些在溶液中能预先形成离子的化合物和可以获得多个质子的大分子（如蛋白质） APCI不适合可带多个电荷的大分子，其优势在于弱极性或中等极性的小分子的分析。 * 2.正、负离子模式的选择 　选择的一般原则为： 正离子模式：适合于碱性样品，可用乙酸或甲酸对样品加以酸化。样品中含有仲氨或叔氨时可优先考虑使用正离子模式。 负离子模式：适合于酸性样品，可用氨水或三乙胺对样品进行碱化。样品中含有较多的强伏电性基团，如含氯、含溴和多个羟基时可尝试使用负离子模式。 * 3.流动相的选择 常用的流动相为甲醇、乙腈、水和它们不同比例的混合物以及一些易挥发盐的缓冲液，如甲酸铵、乙酸铵等，还可以加入易挥发酸碱如甲酸、乙酸和氨水等调节pH值。 LC／MS接口避免进入不挥发的缓冲液，避免含磷和氯的缓冲液，含钠和钾的成分必须＜l