实验一 有丝分裂与减数分裂的装片制作.pptVIP

实验一 有丝分裂与减数分裂的装片制作 授课教师：郑 磊 2009.11.3 实验目的 掌握植物染色体制片的方法（压片法） 分别制作一张合格的临时装片和永久装片 实验原理 压片法是把植物的器官或组织经过处理后压在载玻片上，使细胞成一薄层，以便进行观察。 此法主要应用于植物染色体观察、染色体计数及细胞分裂的观察。 所用材料多为单细胞生物、小型群体藻类以及植物体的幼嫩部分，如根尖、茎尖、花药等。 主要仪器及用具 显微镜、刀片、载玻片、盖玻片、小滴瓶（30ml棕色）、烧杯（50～100ml）、纱布、滤纸条、解剖针、镊子等。 实验材料及试剂 实验材料 大蒜根尖、大葱花蕾 试剂 （1）固定液：卡诺固定液 纯酒精 3 冰醋酸 1 （2）保存液：70%乙醇 （3）染色液：卡宝品红染液 试剂 （4）0.05%秋水仙素水溶液 （5）1mol/L HCl （6）45% 醋酸 （7）二甲苯 （8）中性树胶 （9）液氮 实验内容与方法 有丝分裂永久装片的制作过程 　(1)取材：将大蒜于25℃水培，待根长至1.５cm左右，在上午8时～11时之间，切下长约0.5cm的根尖，进行预处理。 　(2)预处理：目的使分裂细胞的染色体缩短和比较分散，便于观察和计数。其方法是将材料切下放入0.05％秋水仙素水溶液中处理2～4h。 (3) 固定：经预处理的根尖放入卡诺固定液中固定0.5～24h。固定后可转入70％酒精中保存，4℃冰箱中可长时间保存。 (4) 解离：取固定好的大蒜根尖放在小烧杯内，加解离液（1mol/L HCl） 于室温放置8～10min。 (5) 染色：解离好的材料用蒸馏水冲洗3～5次，置于载玻片上，滴1～2滴卡宝品红，染色10～15min。 (6) 压片与镜检：染色完毕，加上盖玻片，用拇指挤压盖玻片，再用解剖针或铅笔末端对准材料轻轻敲击，使组织均匀分散成一薄层，再用滤纸吸去多余染液，镜检。 (7)封固：理想的临时装片可采用冰冻脱片封片法制成永久装片。 将制作好的临时装片直接放在液氮或冰冻制冷器中进行冷冻，然后用刀片迅速将载片和盖片分开，同时放入37℃温箱中烘干，在二甲苯中浸泡10～20min，滴中性树胶，加盖片封片， 37℃温箱中烘干，即制成永久装片。 也可按以下步骤制成永久制片： (1) 将压片直接倒放在盛有 45％醋酸+ 95％酒精（1：1）的培养皿中，并使玻片稍成倾斜(一边可垫上一玻棒)。待过5～10min，即可见盖玻片从载玻片上脱落下来，此时即按原来位置翻开。 (2) 将已分开的载玻片与盖玻片，用吸水纸吸去边去多余的醋酸液，换入冰醋酸+无水酒精(1：1)中，3min。 (3) 将载玻片与盖玻片移入无水酒精中(二次)，每次3min。 (4) 移入无水酒精+二甲苯(1：1)，3min。 (5) 移入二甲苯(二次)，各3min。 (6) 用加拿大树胶按原来的位置封藏玻片。 (7) 移入温箱烘干(20～30℃)，3h，即得永久制片。 减数分裂临时装片的制作过程 基本与有丝分裂临时制片过程相同： 取材 固定 染色 压片 镜检 任务与要求 制作一张有丝分裂永久装片和一张减数分裂临时装片。 结合自己的实验过程，谈谈植物染色体制片需要注意什么。 * * *