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莫能菌素生物合成调控基因的敲除论文
reconstructed, and the homologus arms were increased to 3-4Kb to improve the efficiency of homologus double exchange. KEY WORDS ：monensin, monensin biosynthesis, gene knockout , gene overexpression III 目 录 前 言 1 第一章 文献综述 2 1.1 聚醚类抗生素 2 1.1.1 聚醚类抗生素的结构与应用 2 1.1.2 莫能菌素的理化性质 4 1.2 莫能菌素的生物合成4 1.2.1 莫能菌素的生物合成单元4 1.2.2 莫能菌素生物合成基因簇 5 1.2.3 莫能菌素生物合成的转录调控基因 7 1.3 肉桂地链霉菌的发酵与异源表达 8 1.3.1 肉桂地链霉菌的发酵 8 1.3.2 肉桂地链霉菌的异源表达 9 1.4 本文主要研究内容和研究意义 10 1.4.1 主要研究内容 10 1.4.2 研究意义 10 第二章 肉桂地链霉菌发酵培养基的改良 11 2.1 材料与方法 11 2.1.1 菌种 11 2.1.2 实验仪器与实验试剂 11 2.1.3 肉桂地链霉菌的培养 12 2.1.4 莫能菌素效价的测定 13 2.1.5 莫能菌素发酵液pH 的测定 15 2.1.6 肉桂地链霉菌生物量的测定 15 2.1.7 肉桂地链霉菌抗性实验 15 2.1.8 肉桂地链霉菌菌种的复壮 15 2.1.9 肉桂地链霉菌发酵培养基成分的选择 15 2.2 结果与讨论 16 2.2.1 肉桂地链霉菌的抗性 16 2.2.2 肉桂地链霉菌发酵特性 17 2.2.3 肉桂地链霉菌高产菌株的筛选 17 IV 2.2.4 肉桂地链霉菌发酵培养基的改良 18 2.3 本章小结 20 第三章monH 基因功能的研究 21 3.1 材料与方法 21 3.1.1 菌种与质粒 21 3.1.2 实验仪器与实验试剂 21 3.1.3 大肠杆菌的转化 23 3.1.4 大肠杆菌的电转化 23 3.1.5 质粒操作 24 3.1.6 PCR 操作 25 3.1.7 链霉菌基因操作 27 3.2 monH 基因敲除载体与过表达载体的构建方法 29 3.2.1 monH 敲除载体构建 30 3.2.2 monH 过表达载体的构建 31 3.2.3 基因敲除菌株的筛选方法 34 3.3 结果与讨论 35 3.3.1 monH 敲除载体的构建 35 3.3.3 monH 过表达载体的构建 37 3.3.4 monH 回补菌株和过表达菌株的发酵
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