草莓镶脉病毒编码蛋白对其启动子的调节作用及其亚启动子鉴定.pdfVIP

构建 SVBV 中国分离物各 ORF 植物表达载体 pBIN-ORF I、pBIN-ORF II、 pBIN-ORF III、pBIN-ORF IV 、pBIN-ORF V 和 pBIN-ORF VI，电击转化农杆菌，将 含有各表达载体的农杆菌分别和含有表达载体 pINT P 1 的农杆菌等量混合，瞬间浸润 本氏烟叶片，荧光光度法定量分析gus 表达活性，结果显示pBIN-ORF II 和 pBIN-ORF V 分别与 pINT P 1 共浸润时 gus 蛋白酶活性均显著高于 pINT P 1 单独浸润，pBIN-ORF IV 与 pINT P 1 共浸润时 gus 蛋白酶活性显著低于 pINT P 1 单独浸润，pBIN-ORF I、 pBIN-ORF III 、pBIN-ORF VI 分别与 pINT P1 共浸润时 gus 蛋白酶活性与 pINT P1 单独浸润均无显著差异。结果表明，ORF II 和 ORF ORF V 编码蛋白均能提高 P 1 启 动子的驱动活性，ORF I、ORF III 、ORF VI 编码蛋白对 P 1 启动子驱动活性没有影 响，ORF IV 编码蛋白降低 P1 启动子的驱动活性。 5 SVBV 亚启动子初步鉴定 克隆 SVBV 中国分离物和美国分离物的亚启动子 sP-cn 和 sP-us ，分别置换 pINT 12 1 载体 gus 基因上游的 35S 启动子，获得植物表达载体 pINT sP-cn 和 pINT sP-us，电击转化农杆菌，瞬间浸润本氏烟叶片，荧光光度法测定结果表明，pINT sP-cn 和 pINT sP-us 的平均相对 gus 活性极低，与未注射本氏烟相比没有显著差异，说明这 2 亚启动子基本没有驱动活性。 关键词：草莓镶脉病毒；SVBV 启动子；病毒编码蛋白；调节作用；SVBV 亚启动子 II Abstract Strawberry vein banding virus was classified as a member of Caulimoviridae, Caulimovirus. SVBV has a double-stranded and circle DNA genome containing 7 ORFs encoding different functional proteins and 2 promoters. The full-length promoter P1 of SVBV located at the downstream of gene ORF VI , which has similar position to 35S promoter of CaMV, can drive the transcription of gene ORF I, ORF II, ORF III, ORF IV and ORF V. Transcription of gene ORF VI of SVBV was driven by an independent sub-promoter sP, which is similar to 19S promoter of CaMV. Driven activity, exogenous gene expression pattern and sta