乙肝两对半检测中南京.pptxVIP

乙肝两对半免疫学检测相关问题研讨;;;HBsAg抗原表位 1、共同决定簇： a（ aa124-147）； 2、型特异决定簇： （1） d/y（ aa122，赖氨酸/精氨酸）； （2） w/r（ aa160，赖氨酸/精氨酸）； 四种亚型：adr、adw、ayr、ayw。 ;检测中常见的问题;双抗体夹心一步法的钩状效应（示意图）:;;HBsAg检测试剂原材料与钩状反应的关系： 原材料：HBsAb。 多克隆抗体：免疫动物或直接从感染者血清中所获得，来源于不同的B细胞克隆，可含有针对同一抗原分子不同的抗原表位（a、 d/y、 w/r）的多种定向抗体。 单克隆抗体：由一株B细胞杂交瘤产生的只针对某一特定的抗原表位的高度均一，高度专一性的抗体。 ;McAb制备的试剂受钩状效应的影响较PcAb为轻：;McAb试剂的钩状效应;PcAb试剂的钩状效应;;;;;;;Human Anti-Mouse Antibodies (HAMA);3) S基因突变引起的HBsAg漏检：;能导致HBsAg阴??的S区变异 145甘氨酸 精氨酸 aa124 半胱氨酸 酪氨酸 aa129 谷氨酸 天冬氨酸 aa131 苏氨酸 天冬氨酸 aa131 蛋氨酸 苏氨酸 aa122-124 插入氨基酸 前S1/S2部分缺失 不一定HBsAg抗原性发生改变后就一定漏检。很多时候野生型与突变型是混合存在的，这种情况虽然有突变，同样可以检出 。;4)RF引起的假阳性 RF是一种自身抗体，能和多种动物IgG的Fc段结合。由于固相抗体和标记抗体均为IgG，双抗体夹心法测抗原可能有RF的干扰，产生假阳性。;解决办法： 用IgG的Fab 或F(ab’)片段作酶结合物替代完整的IgG； 标本用联有热变性IgG的固相吸附剂(G蛋白)处理； 将热变性IgG加入到标本稀释液中； 离心分离IgM和IgG； 加入羊抗人IgG。 鼠源单克隆抗体对RF的亲和力较低，也能明显地降低RF对结果的干扰。 ;McAb和PcAb在HBsAg检测中的应用;;;;;;;;　 HBsAb为分别针对HBsAg五种表位（a、 d/y 、w/r） 的不同抗体，其中90%的HBsAb为针对“a”的抗体，为最 重要的保护性体，对不同亚型感染均有保护作用（但交 叉免疫不完全），也是HBsAb各种抗体中最重要的血清 标志物。 　　用于检测HBsAb的抗原，无论天然抗原或重组抗 原，必须具有“a”表位，一般为ad、ay亚性联合应用。 ?? HBsAb试剂原材料质量优良，检测方法为双抗原夹心 法，定量定性检测的结果均准确可靠。 ;;;;;;;;; ;;;;;;;;HBeAb检测模式：;;.;2）液相-液相竞争法;;;;;3）固相-液相-液相竞争法：;.;;;;;;; HBeAg-HBeAb血清转换 (HBeAg 消失anti-HBe 出现) 是HBeAg阳性的慢肝病人长期缓解的标志 ;;;;;;;