凯氏定氮法.pptxVIP

;凯氏法测定试样中的含氮量：在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白含量。 ;以蛋白质为例： 消化：蛋白质 + H2SO4→（NH4）2SO4 + SO2↑+ CO2 ↑+ H2O 蒸馏：（NH4）2SO4 + 2NaOH→ Na2SO4 + 2 H2O + 2NH3 ↑ 2NH3 + 4H3BO3→（NH4）2B4O7 + 5H2O 滴定：（NH4）2B4O7 + 2HCl +5H2O→2NH4Cl + 4 H3BO3 ;凯氏定氮装置图;（1）消化、 （2）蒸馏、 （3）吸收、 （4）滴定。;精密称取0.2-2.0g固体样品或2-5g半固体样品或吸取10-20ml液体样品（约相当氮30-40mg），移入定氮瓶中，加入0.2g硫酸铜和6g硫酸钾，稍摇匀后瓶口放一小漏斗，加入20mL浓硫酸，将瓶以450角斜支于有小孔的石棉网上，使用万用电炉，在通风橱中加热消化，开始时用低温加热，待内容物全部炭化，泡沫停止后，再升高温度保持微沸，消化至液体呈蓝绿色澄清透明后，继续加热0.5h，取下放冷，小心加20mL水，放冷后，无损地转移到100mL容量瓶中，加水定容至刻度，混匀备用，即为消化液。 试剂空白实验：取与样品消化相同的硫酸铜、硫酸钾、浓硫酸，按以上同样方法进行消化，冷却，加水定容至100mL，得试剂空白消化液。 ; 首先在蒸气发生器中加约2/3体积蒸馏水，加入数滴硫酸使其保持酸性，以避免水中的氨被蒸出而影响结果，并放入少许沸石以防爆沸。沿小玻杯壁加入蒸馏水约20mL让水经插管流入反应室，但玻杯内的水不要放光，塞上棒状玻塞，保持水封，防止漏气。蒸气发生后，立即关闭废液排放管上的开关，使蒸气只能进入反应室，导致反应室内的水迅速沸腾，蒸出蒸气由反应室上端口通过定氮球进入冷凝管冷却，在冷凝管下端放置一个锥形瓶接收冷凝水。 从定氮球发烫开始计时，连续蒸煮5min，然后移开煤气灯。冲洗完毕，夹紧蒸气发生器与收集器之间的连接橡胶管，由于气体冷却压力降低，反应室内废液自动抽到反应室外壳中，打开废液排出口夹子放出废液。如此清洗2～3次，再在冷凝管下换放一个盛有硼酸-指示剂混合液的锥形瓶使冷凝管下口完全浸没在溶液中，??馏1～2min，观察锥形瓶内的溶液是否变色。如不变色，表示蒸馏装置内部已洗干净。移去锥形瓶，再蒸馏1～2min，用蒸馏水冲洗冷凝器下口，关闭煤气灯，仪器即可供测样品使用。 ;以0.01mol/L盐酸标准溶液滴定至灰色为终点 若呈粉红色，表明已超越滴定终点，可在已滴定耗用的标准盐酸溶液用量中减去0.02mL，每组样品的定氮终点颜色必须完全一致。空白对照液接受瓶内的溶液颜色不变或略有变化尚未出现绿色，可以不滴定。记录每次滴定耗用标准盐酸溶液毫升数，供计算用。 ;运算下列公式计算出每次无机氮标准样品和未知样品的总含氮量。 式中 WN——每毫升样品的含氮毫克数； A——滴定样品消耗的盐酸量（mL）； B——滴定空白消耗的盐酸量（mL）； C——测定样品所取用量（mL）； 0.0100——标准盐酸物质的量浓度（mol/L）； 14.008——每摩尔氮原子质量（g/mol）。 三次样品测定的含氮量相对误差应小于±2%。 样品粗蛋白含量＝总氮量× 6.25 ;‘ 凯氏定氮法的缺陷 ’;谢谢欣赏！