凯式定氮法实验方法.pptVIP

凯氏定氮法 凯氏定氮法： 仪器：硝化炉 凯氏定氮仪 试剂：浓硫酸 0.5 mol/L 盐酸 40% NaOH 2% 硼酸 粉末硫酸钾-硫酸铜混合物（K2SO4: CuSO4·5H2O=3 : 1） 混合指示剂：由50 ml 0.1%甲基蓝酒精溶液与100 ml 0.1% 甲基红酒精溶液混合而成，酸色为紫红色，碱色为绿色 凯氏定氮法：测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。在有催化剂的条件下，用浓硫酸硝化样品将有机氮都转变成无机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，随水蒸气馏出并为过量的酸液吸收，再以标准酸滴定，就可计算出样品中的氮量。由于蛋白质含氮量比较恒定，可由其氮量计算蛋白质含量，故此法是经典的蛋白质定量方法。 凯氏定氮法： 硝化：硝化炉 实验步骤：取2ml样液，加入到硝化管中，加入1.5g的催化剂（K2SO4: CuSO4·5H2O=3 : 1），后在通风橱中进行操作。在消化管中加入放入浓硫酸6ml消化至消化管内的液体呈现出澄清的浅蓝色。去除消化管，将其冷却后定容到50mL容量瓶中。 在消化时，电压先调低，约100v左右，一小时后再调最大。直到消化成绿色透明状。 硝化温度：300—400℃ 实验原理：被测的天然含氮有机物与浓硫酸共热时，其中的碳、氢元素转变成CO2和H2O，而氮元素转变成氨，并进一步与硫酸反应生成硫酸铵，此过程称为“消化”。消化时分解反应进行得很慢，需要加入硫酸钾以提高沸点（可由290℃提高到400℃），加入硫酸铜作为催化剂（其他氧化剂如H2O2也可）。 蒸馏：凯氏定氮仪 实验步骤：①清洗凯氏定氮仪装置（重要） 连接进水口与自来水管，打开水龙头。打开弹簧夹2，使水进入夹套至稍高于出水口，关闭弹簧夹2和3，用酒精灯加热使蒸汽通过进气口进入反应室进行洗涤，在冷凝管下口放一个盛有硼酸-指示剂混合液的锥形瓶，冷凝管下端应完全浸没于液体中，洗涤1~2 min，观察锥形瓶中溶液是否变色，若基本不变色，证明蒸馏器已洗涤干净。将火移开，打开弹簧夹1，从加样漏斗加入少量蒸馏水，关闭弹簧夹1，由于夹套内温度降低使压力下降，可把反应室内液体通过进气口吸出到夹套内。如此重复数次清洗反应室，仪器即可使用。 蒸馏：凯氏定氮仪 实验步骤：②蒸馏操作 加入5ml的消化稀释液，用20ml的2%的硼酸-混合指示剂封住蒸馏口（关掉P1和P3），进样20ml的40%的氢氧化钠，后加入少许水冲洗，水封住进样口。酒精灯加热蒸馏瓶。当第一滴氨水从冷凝管中滴下的时候，计时5min，后将硼酸溶液稍微离开蒸馏管口，让蒸馏管口在硼酸液面吹2min，清洗蒸馏管口。 蒸馏时，碱液一定要控制好量，硼酸里面的指示剂颜色变为蓝色后要再蒸馏五分钟左右。 滴定：滴定管 实验步骤：用0.5 mol/L 的盐酸滴定 用HCl滴定兰色蒸馏液和硼酸液的混合物，直至蓝色褪去，稍微有一点粉色，滴定结束。 以上实验再重复5～9两次。 计算：此为蛋白质的量，某些地方需要修改 谢谢观赏 THANKS