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时间分辨荧光免疫分析的特点 特异性强 灵敏度高 检测动态范围宽，可达4—5个数量级 标记物制备简单，稳定性好，使用时间长 时间分辨荧光免疫分析的应用 （一）蛋白质和多肽激素分析 （二）半抗原分析： （三）病原体抗原/抗体分析 （四）肿瘤标志物分析 （五）干血斑样品分析 （六）核酸分析 （七）测定天然杀伤细胞的活力 返回总目录 光源 单色器 检测器 显示 样品池 UV分光光度计结构示意图 1 激发光源 激发光源应具有稳定性好、强度大、适用波长范围宽等特点。 荧光计：高压汞灯(锐线光谱) 荧光分光光度计：高压氙灯(连续光谱)。 荧光计通常采用两块滤光片作单色器： 激发滤光片 和荧光滤光片 作用： 让所选择的激发光透过并照射于被测试样上。 激发滤光片放在光源和样品池之间。 2 单色器 位置：放在试样池和检测器之间。 作用：滤去杂质荧光，让荧光物质发出的荧光通过，照射到检测器上。 荧光滤光片 第一滤光片 330nm 360nm 400nm 选择产生荧光 效率最高 的激发波长 500nm 530nm 第二滤光片 420nm 450nm 470nm 消除其它 杂光干扰,让 510nm 带测样品产 550nm 产生最强荧 600nm 光通过 650nm 荧光计常用滤光片作单色器，分激发光滤光片和荧光滤光片。它们的功能比较简单，价格便宜，适用于固定试样的常规分析。 大部分分光荧光计采用光栅作为单色器。 荧光分析所用的试样池需用低荧光材料，常用石英池;不能用普玻。 试样池形状以散射光较小的方形为宜。 3 样品池 分光荧光计：常用光电倍增管作检测器。 4 检测器 化学发光（ChemiLuminescence） 由于化学反应（通常是氧化）产生电子能级处于激发态的物质，后者通过跃迁释放能量产生光子，从而导致的发光现象。 化学发光 (CL) 分析法是分子发光光谱分析法中的一类。 它主要是依据化学检测体系中待测物浓度与体系的化学发光强度在一定条件下呈线性定量关系的原理，利用仪器对体系化学发光强度的检测，而确定待测物含量的一种痕量分析方法。 化学发光图片 化学发光 化学发光与其它发光分析的本质区别是体系产生发光 ( 光辐射 ) 所吸收的能量来源不同。 体系产生化学发光，必须具有一个产生可检信号的光辐射反应和一个可一次提供导致发光现象足够能量的单独反应步骤的化学反应。 发光反应的类型 化学发光的系统 化学发光常用的化学试剂及其原理 任何一个化学发光反应都包括两个关键步骤，即化学激发和发光。 因此，一个化学反应要成为发光反应，必须满足两个条件： 第一：反应必须提供足够的能量（ 170 ～ 300KJ ／ mol ） ； 第二，这些化学能必须能被某种物质分子吸收而产生电子激发态，并且有足够的发光效率。 发光效率 化学发光反应的发光效率是指发光剂在反应中的发光分子数与参加反应的分子数之比。 对于一般化学发光反应，值约为 10 － 6 ，较典型的发光剂，如鲁米诺，发光效率可达 0.01 。 发光效率大于 0.01 的发光反应极少见。 鲁米诺及其衍生物 鲁米诺的衍生物主要有异鲁米诺、 4— 氨基已基 —N 一乙基异鲁诺及 AHEI 和 ABEI 等。 鲁米诺在碱性条件下可被一些氧化剂氧化，发生化学发光反应，辐射出最大发射波长为 425nm 的化学发光。 鲁米诺及其衍生物的应用 在通常情况下鲁米诺与过氧化氢的化学发光反应相当缓慢。 但当有某些催化剂存在时反应非常迅速。最常用催化剂是金属离子。 在很大浓度范围内，金属离子浓度与发光强度成正比，从而可进行某些金属离子的化学发光分析。 化学发光的应用 化学发光的应用 化学发光的应用 化学发光的应用 化学发光的应用 利用尿液的化学发光可以研究肾脏功能的变化。 将 Fe 2 + 盐加入尿液中，测量其化学发光。 发现肾功能不足者尿液的发光强度降低。 与正常健康人相比，阑尾炎患者尿液的发光强度则有不同程度的提高。 利用这一方法可以评估