人白血病HL60细胞的分化状态对细胞凋亡的影响.pdfVIP

·496- 药学学报 ActaPharmaceuticaSinica1997．32(7)：496～501 人白血病HL60细胞的分化状态对细胞凋亡的影响 孟凡宏 何琪杨 薛绍自 R7；。72 (北京师范大学生物系，北京100875； 中国中医研究院基础理论研究所，北京100700) 摘要 用细胞培养和流式细胞术等方法，研究人自血病HL60细胞诱导分化詹，对三尖杉酯碱(Har) 和喜树碱(Cam)诱导细胞凋亡的影响。结果表明，l2一豆蔻酰及 l3一乙酸佛波醇以16nmol·L。。浓度处理 HL60细胞24h，细胞向单核／巨噬细胞方向分化，阻断于G．期；分化细胞抗Har和Cam诱导的细胞凋 亡，但其c—myc基因的表达无变化 1．4％二甲基亚砜处理HL60细胞48h，细胞向粒细胞方向分化．阻 断于G．期1分化细胞抗Cam，而不抗 Har诱导的细胞凋亡；分化细胞的~-myc基因表达明显下降。结果 提示，人自血病HL60细胞的分化状态，明显影响三尖杉醇碱和喜树碱诱导的细胞凋亡，但可能与c—myc 基因的表达变化无关。 关键词 细胞分化；细胞凋亡；三尖杉醇碱；人白血病HL60细胞；C-myc基因 二甲基亚砜(dimethylsulfoxide，DMSO)、 材 料 和 方 法 l2．豆蔻 酰、l3．乙酸佛 波 酯 (phorbol12． myristate13一acetate，PMA)和维 甲酸 (retinole 药品 PMA购 自河南浙川制药厂，用 acid，RA)可诱导人白血病HL60向单棱／巨噬 DMOS 配成 1mmol·LI1母液。Cam 购 自 细胞、粒细胞方向分化_l-3]。另外，HL60细胞 Sigma公司，用DMOS 溶解成 1mg·ml 母 的分化状态影响对细胞凋亡的反应。PMA诱 液。Har购 自中国医学科学院协和药厂，用 导HL60细胞分化后，分化细胞对拓扑异构酶 PBS配成 1nag·ml 母液。 I和II抑制剂诱导的细胞凋亡，有明显的抗 细胞培养 人白血病HL60细胞培养于含 性；而用RA诱导的分化细胞，也有抗细咆凋亡 10％小牛血清的RPMI1640(GIBCO)培液中， 的作用．且随分化程度的加深，抗性增加4【]。 在5％co2，37(2的条件下培养，所有实验的 DMOS 诱导HL60细胞分化后，明显抑制喜树 细胞均处于对数生长期。 碱(camptothecin，Cam)诱导的凋亡_5J。HL60 流式细胞术 收集 1×10细胞，用预冷 细胞被 1，25一二羟基维生素 诱导分化后，也 的70％酒精固定过夜，PBS洗3次后．经0．5 抑制钙离子载体A23187诱导的细胞凋亡_6]。 mg·ml RNaseA消化 30min，终浓度 65 因此，HL60细胞被 PMA和 DMOS 诱导分化 · I1的碘化丙锭 (propidium iodide，PI)染 后，观察其对 Cam和三尖杉酯碱(harringto— 色 1h后，于FACS420型流式细胞仪测定。 nine，Har)诱导的细胞凋亡的影响，有一定的 染色质凝集观察 离心收集细胞，PBS洗 1次后用 Hochest33342(15u．mol·LI1)和PI 理论意义。 (100u．g·ml)双染15min，紫外激发，统计染 色质凝集细胞的比例和PI阴性率，每次计200 个细胞，实验重复3次。 本文于 1996年8月22日收到。 本文为国家自然科学基金资助项目．编号：393g0024 RT-PCR测定 e-Ⅲc基因表达的变化 c_ 一联系人