鲜三七根茎中提取三七总皂苷的纯化及脱色工艺研究.docVIP

鲜三七根茎中提取三七总皂苷的纯化及脱色工艺研究作者：周家明 高明菊 赵爱 马妮 崔秀明 朱琳来源：《科技创新导报》2011年第14期 ????????摘 要:目的:研究影响分离、纯化、脱色三七总皂苷的主要影响因素,确立三七总皂苷纯化脱色工艺。方法:鲜三七提取液,按醇沉1次,时间为12h,醇沉浓度为70%的乙醇,醇沉浓度与样液比例为1∶1,加絮凝剂浓度为4%的工艺进行处理,采用D101大孔吸附树脂富集纯化和D941离子交换树脂脱色三七总皂苷。结果:70%的乙醇为洗脱剂,上柱液浓度为0.2g生药/ml,上柱液的量为200ml,上柱后先用蒸馏水快速冲柱的倍量为1.5,洗脱剂的倍量为3倍,洗脱时的速度(滴速)为60滴/min。结论:D101大孔吸附树脂富集纯化和D941离子交换树脂脱色三七总皂苷,效果较好。 ????????关键词:纯化脱色树脂絮凝剂 ????????中图分类号:TQ461 文献标识码:A 文章编号:1674-098X(2011)05(b)-0002-02 ????????三七Panax notoginseng(Buck)F.H. Chen为五加科人参属植物,有“金不换”、“南国神草”等美誉,是我国名贵中药材,也是云南独具特色的中药材资源,在云南的中药产业中占有举足轻重的地位和作用。其具有活血祛瘀,通脉活络,抑制血小板聚集和增加脑血流量。用于脑路瘀阻,中风偏瘫,心脉瘀阻,胸痹心痛;脑血管病后遗症,冠心绞痛属上述症候者。目前,用干品三七来提取三七总皂苷进行纯化及脱色的有文献报道,而对鲜三七提取的三七总皂苷进行纯化和脱色还没有文献报道,因为在鲜三七提取过程中含有大量的糖类、鞣质和淀粉等杂质,在分离纯化时很困难,容易堵塞柱子。所以,我们在提取时采用了生物酶和絮凝剂来进行处理。本文就是以鲜三七根茎提取的三七总皂苷,通过对D101大孔吸附树脂富集纯化和D941离子交换树脂脱色工艺条件7进行研究,探索对鲜三七提取的三七总皂苷进行纯化及脱色工艺的可行方法。 ????????1 仪器和试药 ????????1.1 仪器 ????????离心用DL—40B离心机;减压浓缩用低温冷却液循环泵(型号:OLS8—5/10)、循环水式多用真空泵(SHB—111)、旋转蒸发仪(BUCHI Rotavaper R—200)。日本岛津LC-10Avp高效液相色谱仪,SPD紫外检测器,电子分析天平,超声波清洗器。 ????????1.2 试药 ????????鲜三七根茎中提取的三七总皂苷,由文山三七研究院新产品开发研究所试制;对照品三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1购自中国药品生物制品检定所;乙腈为色谱纯,水为重蒸水。絮凝剂:购自山东奥康生物科技有限公司。 ????????2 实验方法 ????????2.1 对鲜三七提取的三七总皂苷进行纯化研究[1] ????????对干三七提取的三七总皂苷进行分离提纯,经大量查资料证明,目前大孔树脂有不同的三种型号:D101、AB-8及HPD-100,3种树脂均可以富集、分离纯化三七总皂苷,其中D101及HPD-100均为聚苯乙烯结构的非极性大孔树脂且表面积均为400～500m2/g,但HPD-100为D101升级换代产品,AB-8为弱极性树脂,为此我们选择了D101大孔树脂进行分离纯化。 ????????在用D101大孔树脂纯化之前,我们先用最佳提取工艺:把鲜三七根茎破碎为10目的鲜三七颗粒,加6倍量70%的乙醇,回流提取3次,每次2h,再加入0.1ml/200g生物酶A,0.2ml/200g生物酶B,可得到鲜三七提取液。 ????????因鲜三七提取液中含有大量糖类、鞣质和淀粉等杂质,所以,造成在分离纯化时很困难,容易堵塞柱子,所以,采用了絮凝剂来进行醇沉。表1就是我们考察的五个因素:醇沉的时间、醇沉乙醇的浓度、提取液浓缩后与乙醇浓度醇沉比例、絮凝剂的量、醇沉次数。 ????????经过以上因素的考察,分析,反复试验,得出三因素的结论:醇沉最佳时间为12 h;醇沉乙醇浓度为70%;醇沉次数为1次。 ????????然后我们又进行其余两个因素:提取液浓缩后与乙醇浓度醇沉比例与絮凝剂的用量进行两因素水平正交试验。按以上最佳工艺提取的鲜三七提取液,我们确定了醇沉次数为1次,醇沉时间为12h,醇沉浓度为70%的乙醇。现按醇沉浓度与提取液按不同比例,加不同的絮凝剂进行了二因素正交实验(表2)。 ????????通过实验,可确定鲜三七提取液处理工艺条件为:醇沉浓度与样液比例为1∶1,絮凝剂浓度为4%。 ????????把提取的鲜三七提取液,按醇沉1次,时间为12h,醇沉浓度为70%的乙醇,醇沉浓度与样液比例为1∶1,加絮凝剂浓度为4%的工艺进行处理。处理好的三七提取液,上D