土壤中微生物的分离纯化-江苏省句容中等专业学校.ppt

江苏省句容中等专业学校 * 尹 玉 芬 2016.11.11 土壤中微生物的分离纯化 * 知识回顾 1.什么是微生物接种？ 将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上的过程叫做接种。 2.什么是无菌操作？ 在微生物实验工作中，控制或防止各类微生物的污染及其干扰 的一系列操作方法和有关措施就叫无菌操作技术。 * 课程引入 土壤中微生物的分离纯化 * 土壤中微生物的分离纯化 * ※ 纯种分离含义 ※ 几种常见的微生物纯种分离方法 1.平板分离法 2.画线分离法 学习内容 土壤中微生物的分离纯化 * 土壤中微生物的纯种分离 从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。 分离源：自采集土壤样品 培养基 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，高氏Ⅰ号培养基、马丁氏 （孟加拉红）培养基 溶液或试剂 盛4.5ml无菌水的试管，盛90ml无菌水并带有玻璃 珠的三角烧瓶。 仪器或其他用具 振荡器，无菌培养皿，无菌吸管，接种环，电 磁炉，培养箱，吸耳球等。 土壤中微生物的分离纯化 * 一、稀释涂布平板法（全组完成） 1. 编号：取无菌平皿24个。另取无菌水４支，依次标明10-2、10－3、 10-4、10-5。 2. 倒平板：分别将三种培养基溶化后，冷却至55～60℃时，每种培 养基各倒8皿，标注培养基名称。其中，高氏Ⅰ号培养基 在倒入前需先添加10滴10%的苯酚。 土壤中微生物的分离纯化 高氏Ⅰ号培养基在倒入前需先添加10滴10%的苯酚原因？ * 一、稀释涂布平板法（全组完成） 土壤中微生物的分离纯化 高氏一号加的酚是显色用的，目的是区分目标菌。 * 3.制备土壤稀释液 放菌液时吸管尖不要碰到液面，即每一支吸管只接触一个稀释度。 土壤中微生物的分离纯化 一、稀释涂布平板法（全组完成） * 4. 涂布 土壤中微生物的分离纯化 一、稀释涂布平板法（全组完成） * 5.培养 将高氏Ⅰ号平板、马丁氏平板倒置于28 ℃ 培养３～５d， 牛肉膏蛋白胨平板倒置于37 ℃ 培养培养1～2d 。 为什么平板放入培养箱中培养时要倒置？ 防止皿盖上冷凝水滴到正在生长的菌落上而将其冲散，影响微生物生长；且不易辨别菌落特征。 土壤中微生物的分离纯化 一、稀释涂布平板法（全组完成） * 6.菌落观察观察并描述土壤样品中分离到的细菌、放线菌、霉菌的菌落特征。 土壤中微生物的分离纯化 一、稀释涂布平板法（全组完成） 培养物 生长情况（+或-） 染菌情况（+或-） 牛肉膏10-2 牛肉膏10-3 牛肉膏10-4 …… * 7. 挑菌落 将培养出的单菌落进行斜面接种，并分别置37℃和28℃温室中培养，此后镜检是否为单一微生物。若有杂菌，继续分离纯化。 土壤中微生物的分离纯化 一、稀释涂布平板法（全组完成） * 1.倒平板：将3种培养基溶化后，各倒一皿。并用记号笔标明培养基名称、样品编号、个人学号等。 2.划线：分别挑取土壤样品中10－1的土壤悬液一环，在三种平板上划线，以分离细菌、放线菌、霉菌。 分区划线、连续划线 土壤中微生物的分离纯化 二、平板划线分离法（个人完成） * 分区划线（适用于浓度较大的样品） 连续划线（适用于浓度较小的样品） 土壤中微生物的分离纯化 二、平板划线分离法（个人完成） * 3.培养将高氏Ⅰ号平板、马丁氏平板倒置于28 ℃ 培养３～５d，牛肉膏蛋白胨平板倒置于37 ℃ 培养培养1～2d 。 4.菌落观察 5.挑菌 挑取单个菌落接种到斜面上培养，此后镜检是否为单一微生物。若有杂菌，继续分离纯化。 土壤中微生物的分离纯化 二、平板划线分离法（个人完成） * 思考题 1. 如何确定平板上某个单菌落是否为纯培养？ 通常情况下，单个菌落就是纯培养，如果不确定是否为纯菌落，可将该菌落继续传代培养，观察下一代是否均为同样的菌落形态。 纯培养的确定除观察其菌落特征外,还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定。 土壤中微生物的分离纯化 ☆ 微生物的纯种分离 ☆ 平板稀释法分离法 ☆ 平板划线分离法 ☆ 操作注意事项 * 1.无菌操作前需对超净工作台进行灭菌（紫外灯、无菌风、酒精消毒） 2.接种环要灼烧灭菌，灭菌后放入菌液或要接触菌体前要冷却，接种后要在火焰上将 多余的菌种烧死。 3.实验操作时菌体不应和火焰太过接近，防止烧死菌体和烧着棉塞。 4.培养时要倒置培养，防止染菌。 5.取单菌落时不要碰到其它的菌落。 6.本实验要严格的按照无菌操