3-2 第四章 2 载体.pptVIP

* 第一节 基因克隆的概念和基本步骤 第四章 基因克隆 第二节 工具酶 (RE, DNA ligase, etc) 第三节 载体 第四节、目的基因的制备 第五节、获得重组DNA：目的基因与载体的体外连接 第七节、 DNA重组体的筛选和鉴定 第八节、 目 的 基 因 的 次 级 克 隆 第六节、转化:将重组DNA分子导入宿主细胞 DNA Cloning 过程 工具 Target DNA fragment RE digestion Plasmid RE digestion Ligation Recombinant plasmid Target DNA fragment Transformation E.Coli without vector die E.Coli with vector grow Culture in the medium containing antibiotic *为什么需要载体? –– 外源片段在宿主细胞内不稳定,无自主复制能力 –– 外源片段无明显的遗传标记以区分阳性细胞 基因克隆的过程 一、什么是载体？ 能够携带外源基因在受体细胞中复制或表达的DNA分子。 Vectors are DNA molecules which can carry the inserted foreign gene to enter host cell, and then can replicate in host cell carrying the inserted foreign gene; sometimes, the foreign gene can be expressed. In another word: Vector can replicate in host, even after a foreign DNA has been inserted. 例如：Plasmid acts as a vehicle that transports the gene into a host cell. 第三节 载体 Vectors Expression Vectors 二、载体的分类 Classification of vectors DNA 载体 克隆载体 表达载体 原核表达载体 真核表达载体 质粒（plasmid） 噬菌体（phage） 粘粒（cosmid） YAC 病毒（virus） Clonging Vectors Prokaryotic ~~ Eukaryotic ~ ~ 为避免重复，克隆质粒和表达质粒放在质粒中讲解，质粒是重点。 (一)、质粒 Plasmids 1、 质粒的概念 2、 质粒的不相容性 3、 克隆质粒 4、 表达质粒 【主要内容】 答：Small plasmid can avoid problems such as DNA breakage during isolation, thus we can construct recombinant DNA with ease. 1. 质粒的概念 10Kb的优点? origin 质粒可作为基因克隆载体 位于细菌染色体外 小型环状DNA分子 具有自我复制功能: 复制起点。 带有抗性基因等遗传标记。 如:抗氨苄青霉素基因(ampr). Nonessential region。 Plasmid Even 6kb of additional DNA can be inserted. Copy number: The number of plasmids in a cell, can range from only 1-3 copies to 100 copies. Bacterial chromosome Plasmids Cell division Non-integrative plasmid Bacterial chromosome Plasmids Cell division A few types of plasmids are also able to replicate by inserting themselves into the bacterial chromosome. These integrative plasmids may be stably maintained in this form through numerous cell divisions, but will exist as independent elements at some stage. Integrative plasmids 了解内容, 可以忘记 对我们的基因克隆