猪流行性腹泻病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立.pdf

上海农业学报 2017，33(1)：134—137 ActaAgricuhuraeShanghai DOI：10．15955~．issnl000—3924．2017．O1．23 文章编号：1000—3924(2017)01—134-04 猪流行性腹泻病毒双抗体夹心 ELISA检测方法的建立 张清真 ，陶 洁 ，殷秀辰 ，熊年年 ，李 星 ，刘惠莉 ，， (上海市农业科学院畜牧兽医研究所 ，上海201106；上海海洋大学水产与生命学院，上海201306； 上海市农业遗传育种重点实验室，上海 201106；上海种猪工程技术研究中心，上海201302) 摘 要：以乳化灭活的猪流行性腹泻病毒 (PEDV)作为抗原，免疫大 白兔，制备兔抗 PEDV高免血清，纯化 抗PEDVIgG并进行生物素标记。以体外表达的PEDVS蛋白作为抗原，商品化的PEDV单克隆抗体作为捕获抗 体，生物素标记的IgG作为检测抗体，建立了检测PEDV的生物素-亲和素系统的双抗夹心 ELISA方法。结果表 明：该方法最低检测限量为 20ng／txL，且稳定性和特异性较好。对 25份临床猪腹泻样品进行检测，3份检出 PEDV阳性，与 RT—PCR法的符合率为 100％。本研究为PEDV临床检测提供了新方法 ，也为猪腹泻病原的多重 检测技术研究奠定了基础。 关键词 ：猪流行性腹泻病毒检测 ；重组S蛋白；双抗体夹心ELISA 中图分类号：$852．65 文献标识码：A EstablishmentofdoubleantibodysandwichELISA fordetection of porcineepidemicdiarrheavirus(PEDV) ZHANGQing—zhen，，TAOJie ，YINXiu．chen，，XIONGNian—nian，，LIXing，，LIUHui．1i’ (InstituteofAnimalScienceandVeterinaryMedicine，ShanghaiAcademyofAgriculturalSciences，Shanghai 201106，China；CollegeofFisheriesandLifeScience，ShanghaiOceanUniversity，Shanghai201306，China； 。ShanghaiKeyLaboratoryofAgriculturalGeneticBreeding，Shanghai201106，China； ShanghaiEngineeringResearchCenterofBreedingPig，Shanghai201302，China) Abstract：TheemuMfiedandinactivatedporcineepidemicdiarrheavirus(PEDV)wasusedasantigento preparetherabbitantiPEDV hyperimmuneserum．andtheantiPEDV IgG waspurifiedandlabeledwithbiotin． A doublesandwich ELISA methodforthedetectionofbiotinavidin system ofPEDV wasestablished，takingin vitroexpressionofPEDV Sproteinasantigen．commereialPEDV monoclonalantibodyascaptureantibody．biotin labeled IgG asdetectionantibody．Theresultsshowedthatthedetectionlimitofthemethodwas20ng／p~L．and thestabilityandspecificitywerebetter．Twenty．fivesamplesofswinediarrheaweredetected，andpositivePEDV wasdetected in3samples．Thecoincidenceratewith RT PCRWaS100％ ．Thisstudyprovidesanew method