犬粪便中细粒棘球绦虫抗原双抗体夹心ELISA检测方法的建立及应用.pdf

· 82 · 中国生物制品学杂志2017年 1月第 3O卷第 1期 ChinJBiologicalsJanuary2017，Vo1．30No．1 技术方法 犬粪便中细粒棘球绦虫抗原双抗体夹心 ELISA检测方法的建立及应用 刘原源 ，黄书晨 ，高琚珊 ，王晓岑 1宫鹏涛 ，张壮志 ，李建华 ，杨举 ，李赫 ，‘张西臣 1．吉林大学动物医学学院，吉林 长春 130062；2．新疆畜牧科学院兽医研究所，新疆 乌鲁木齐 830000 摘要：目的 建立简便 、特异的检测犬粪便中细粒棘球绦虫抗原的双抗体夹心 ELISA方法 ，并进行验证及初步应 用。方法 以细粒棘球绦虫EdiagA864蛋白为抗原，免疫 日本大耳白兔，制备多克隆抗体 ；利用HRP标记兔抗细粒棘 球绦虫EdiagA864多克隆抗体，通过溶解 、超声方法处理犬粪便样品；以抗细粒棘球绦虫单克隆抗体2D12作为捕获 抗体 ，HRP标记的兔抗细粒棘球绦虫 EdiagA864多克隆抗体为检测抗体 ，通过棋盘法确定抗体最佳包被浓度 、最 佳封闭剂、待检粪样最佳稀释比例及酶标抗体最佳浓度。应用建立的双抗体夹心ELISA法对来 自长春地区的64份 犬粪便样品及来 自新疆的8份犬粪便阳性样品进行检测。结果 兔抗 EdiagA864多克隆抗体的效价为 10。建立的 双抗体夹心ELISA法的最佳检测条件为：抗体包被浓度为 1：50，封闭剂为 1％BSA，粪液稀释度为 1：5，酶标二 抗稀释度为 1：800。建立的双抗体夹心ELISA法与犬贾第虫和犬蛔虫阳性样品均无交叉反应；检测不同稀释度的 粪便液，当稀释至 1：20时，P／N仍大于2；检测6份阳性样品与4份阴性样品的批问和批内变异系数均小于8。用 建立的方法检测8份阳性样品的结果均为阳性，64份待检样品的结果均为阴性。结论 建立的双抗夹心 ELISA方 法特异性较强，敏感性较高，重复性较好 ，为细粒棘球绦虫流行病学调查及诊断提供了一种更简便 、快速、特异的免 疫学检测方法。 关键词：细粒棘球绦虫；双抗体夹心ELISA；EdiagA864；多克隆抗体 中图分类号：R383．3+3 R392—33 文献标识码：A 文章编号：1004—5503(2017)010082—05 Establishmentandapplication ofdouble·antibodysandwichELISA fordetectionofEchinococcusgranulosusantigenindogfeces LIU Yuan—yuan’，HUANG Shu—chen，GAO Jun—shan，WANGXiao—cen，GONG Peng—tao， ZHANG Zhuang—zhi，LIJian—hua。YANGJu，LIHe，ZHANGXi—chen 。CollegeofVeterinaryMedicine，JilinUniversity,Changchun130062，JilinProvince，China Correspondingauthor：ZHANGXi—chen，E—mail：xczhang@jlu．edu．cn Abstract：ObjectiveToestablish，verifyandpreliminarilyapplyasimpleandspecificdoubleantibodysandwichELISA fordeterminationofEchinococcusgranulosusantigen(EdiagA864)indogfeces．MethodsRabbitswereimmunizedwith EdiagA864，and theprepared polyclonalantibodywaslabe|ed byHRP．Dogfecessamplesweredisposed in ul