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Kell血型系统基因分型 　　关键词： Kell血型；基因分型；PCR-SSP法 　　Kell血型是使用抗人球蛋白试验方法(又称为Coombs试验)检出的第1个血型，相应抗体是在一位姓Kell的产妇血清中发现的，故被称为抗-Kell［1］，后来又检出了抗-K的对偶抗体抗-k。K和k抗原均表现为显性遗传，因此具有KK、Kk、kk、和K-k-4种表型。由于Kell抗原的抗原性较强，所以在输血中有较重要的意义。到目前为止，我国已有关于Kell血型系统的血清学分型研究报道，但尚未见采用基因分型技术分型报告。笔者运用PCR-SSP法分析广东人Kell血型的多态性及其分布。 　　1　材料与方法 　　1.1　样本来源　中国地区无血缘关系的随机样本102份，静脉取血，EDTA抗凝。 　　1.2　试剂来源　Kell血型基因分型试剂盒由美国G%26T公司提供(美国马利兰州政府批准文号1998，643259)，试剂混合物中含有PCR缓冲液、dNTP、特异性的K和k基因引物、内对照引物以及染料。 　　1.3　操作方法　盐析法自0.5ml全血中抽提DNA，采用PCR-序列特异性引物(sequence specific primer,SSP)技术，具体操作步骤按试剂盒内说明。 　　1.4　基因频率计算按Mourant AE方法。 　　2　结果 　　2.1　根据PCR产物的有无和片段长度确定其基因型：带有K基因的个体，与Kell-K1分型混合液反应产生143bp的PCR扩增片段；带有k基因的个体，与Kell-K2分型混合液反应产生143bp的PCR扩增片段；同时带有K和k基因的个体，与两种Kell分型混合液反应都产生143bp的PCR扩增片段；每支PCR管内都含有429bp的内对照产物。 　　2.2　广东人Kell血型基因分布及PCR SSP基因分型见附表及附图。 附表　广东人Kell血型基因分布 　 观察值(%) 期望值(%) χ2 基因频率 K＋k＋ 4(4.00) 3.92(3.92) 0.0016 K＝0.02 K＋k－ 0(0.00) 0.04(0.04) 0.0400 k＝0.98 K－k＋ 96(96.00) 96.04(96.04) 0.0000 合计 100(100.00) 100(100.00) 0.0416 P＞0.9 　　注：因试剂盒只针对K、k基因设计，故2例K－k－未统计在内 附图　PCR SSP Kell基因分型结果 　　3　讨论 　　在欧美Kell和ABO、Rh 被并列为3大血型系统，在输血中具有较重要的意义，抗-K、抗-k都会引起溶血性输血反应。我国汉族人Kell血型系统虽大多数为kk，但产生抗K的可能性仍然存在。一项运用抗-K、抗-k血型研究668例北京地区汉族人群的调查发现，K（＋）个体3例，基因频率为0.0022［2］。笔者的研究进一步提示研究Kell血型具有临床意义。 　　Kell血型系统以往采用血清学技术分型，至今无国产抗-K、-k血清供应，进口血清价格昂贵，较难普及，而采用DNA分型技术则一是可以降低成本，适合国内大多数实验室使用；二是标本可长期保存，便于复查及各实验室相互比较结果；三是实验结果易于判定。 　　1984年郝露萍等［3］报道了我国第1例K0血清型，其红细胞表型为K-k-Kp(a-b-)，Js(a-b-)，先证者父亲及2位同胞均为K0型，具有隐性遗传特性。本研究所采用试剂盒只针对K、k基因设计，2例“K－k－”个体其PCR产物均出现清晰内对照带而无特异性带，但由于其遗传背景不明，尚无法确定其基因结构，需进一步进行DNA测序分析，故未列入统计之内，且由于样本较少，进一步的结论有待更多的实验后得出。对K－k－基因结构的进一步分析将揭示中国人Kell血型系统的特有遗传背景，并有助于探讨Kell血型系统的生物学意义。 参考文献 　　1，赵桐茂.人类血型遗传学.北京：科技出版社，1987，112 　　2，郝露萍，张　志，朱玉珍，等.北京地区人群六种红细胞抗原分布调查.中华血液学杂志，1986，7(2)：68 　　3，郝露萍，张　志，朱玉珍，等.一例稀有的K0红细胞表现型.中华血液学杂志，1984，5(5)：300