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2.9 去除蜡质 去除蜡质的简便方法是热水提放冷析蜡，而先用石油醚提取也可先除去叶绿素。或直接用乙醇提取，提取物则不含叶绿素，回收乙醇，再用石油醚提取，以除去油脂和蜡。而用乙腈除去所含的蜡质是较合适的方法。如将茄科植物Petunia integrifolia 的氯仿提取物（显示昆虫拒食活性）悬浮于沸腾的乙腈中搅拌1h，冷却至5℃后，析出蜡状的固态物质。在倾出的上清液中约含有原来提取物的50%。再将该溶液流经C18柱，以乙腈洗脱，可除去其中的叶绿素及一些低极性脂类物质。对具有活性的petuniolides（麦角甾烷类衍生物，如petuniolide C）进行半制备HPLC分离而使其得到纯化。在对菊科植物黄花蒿Artemisia annua 中具有细胞毒的黄酮类和萜类物质进行分离的过程中，也采用了乙腈沉淀的方法。先将该植物的地上部分用己烷提取，提取物溶于20ml氯仿中，加入180ml乙腈后析出蜡质，然后，再进行色谱分离工作。 petuniolide C 2.10 脱除单宁类物质 对植物某一部位进行生物活性测试前，有时要求先除去单宁类物质。可用以下几种方法，用明胶/氯化钠溶液沉淀；用可溶解的聚乙酰吡咯烷酮（PVP）、咖啡因或皮粉处理；或经过聚酰胺柱处理。在上述几种方法中最后一种是最有效的方法，但其选择性较差，有时也回吸附一些除单宁以外的多酚类化合物，因此也有一定的不足。Tan等曾将该法用于对人体免疫缺陷病毒Ⅰ型逆转录酶（HIV-1RT）有抑制作用的的植物提取物的筛选，同时对去除单宁的几种法也进行了比较。在上述方法中，去除单宁的机理是单宁的酚羟基与沉淀试剂中的酰胺官能团形成氢键，产生了不溶的复合物沉淀。存在的问题是一些进有酚羟基的非单宁类物质（如某些黄酮类化合物）也可能被除去。此外，醌类化合物与所用的试剂之间由于会产生共价作用，也可能被除去。 如果想要除去所有的酚类化合物，采用乙酸铅沉淀法是最有效的途径。用10g 乙酸铅溶于100ml水的溶液可达到此目的。 * * 人们只有将新的天然产物纯化之后才能进一步利用谱学技术鉴定其化学结构，测定其理化性质和生物活性，同时提供其作为制药原料、标准品或供做合成工作的起始原料。从一个粗提物中获得纯的化合物通常需经过许多纯化步骤，这些步骤烦琐、耗时。且花费较大。有时，所需化合物得率很低或性质不稳，因而,需要有尽可能多的分离方法以供选择。尽管有时也可能犯这样或那样的错误，但今天人们已有可能通过对各种方法进行审慎地选择来设计一条恰当的快速分离路线。 Joumal of Chromatography Joumal of Liquid Chromatography and Related Technologies Analytical Chemistry Natural Product Reports Phytoehemical Analysis LC-GC Magazine及其他各种专业杂志上 徐任生、陈仲良主编的《中草药有效成分提取与分离》，第二版，上海科学技术出版社，1983年，1989年第二次印刷) 植物成分分析，谭仁祥主编， 参考文献 第一章 样品的制备与纯化 样品的制备对于复杂的分离与纯化非常重要。恰当的样品预处理可免去后续操作过程中的许多麻烦，使分离纯化变得更为容易。无论样品是来源于混有蛋白质的生物体、生产中混有残存催化剂的工业制品，或混有干扰杂质的植物体，通过简单的预处理就可以除去其中大部分不需要的物质。 样品的预处理特别适用于需要使用昂贵的制备型高压液相色谱柱时。尽管制备样品的目的不尽相同，但其中许多操作与分析型高压液相色谱中所采用的一样。当处理生物样品时问题可能更加复杂，因为样品不仅可能含有复杂的大分子，而且还可能混有前面纯化过程中残留的缓冲液、盐及洗涤剂。因此，必须在预处理中去除上述污染物以免污染高压液相色谱柱。 在设计纯化方案时，通常先使用高效与低分辨率的预处理方法，其中包括一些经典的方法，如选择性溶剂提取、过滤、沉淀、透析、离心及简单的常压柱色谱分离等。而一些较新的方法，如超临界流体萃取、固相萃取等则更具有快速、高效的优点。 生物分子(尤其是生物聚合体)与常见的次生代谢产物性质明显不同，需要使用特殊的预处理方法。除常用的离心、沉淀(如用硫酸铵沉淀蛋白质)、离子交换及凝胶过滤等方法(Wehr，1990)外，可用透析、超滤等专用方法。 1．中药化学成分概述 成分分类 生物碱 有机胺类 吡咯类 吡啶类 莨菪烷类 喹啉类 异喹啉类 菲啶类 丫啶酮类 吲哚类 咪唑类 喹唑酮类 嘌呤类 甾体类 帖类 大环类 其他类 苷类 黄酮苷 蒽醌苷 皂苷 强心苷 香