氢化可的松的含量测定.pptVIP

氢化可的松的含量测定 药学专业团队：胡琦兰 ┏实训目标┛ 掌握高效液相色谱法中内标法测定药物含量的基本方法和操作技术。 熟悉内标法的有关计算问题及结果判断。 了解高效液相色谱法测定氢化可的松的原理。 【仪器设备】 高效液相色谱仪、色谱柱、 十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，理论板数按醋酸氢化可的松峰计算一般为6000、醋酸氢化可的松与醋酸可的松的分离度应大于5.5。 紫外吸收检测器 【药品试剂】 乙腈（色谱纯） 水（色谱纯） 甲醇 【实验原理】 供试品经处理后用甲醇溶解并稀释成一定浓度的溶液，进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长254nm处检测醋酸氢化可的松的吸收值，计算出其含量。 ┏实验内容┛ （一）色谱条件与系统适应性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水（70:30）为流动相；检测波长为240nm，理论板数按氢化可的松的松峰计算不低于2000，氢化可的松峰与内标物质峰的分离度应符合要求。 （二）内标溶液的制备 取炔诺酮，加甲醇制成每1ml中含0.40mg的溶液。 （三）对照品溶液的制备 取氢化可的松对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.05mg的溶液。 （四）供试品溶液的制备 取本品适量，精密称定，加甲醇溶解并定量稀释成每1ml中约含0.05mg的溶液。 （五）测定法 精密量取氢化可的松对照品溶液与内标溶液各5ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，取10ul注入液相色谱仪，记录色谱图，计算校正因子；另取供试品溶液与内标溶液各5ml，同法操作，测定待测成分和内标物质的峰面积，计算即得。 【实训指导】 复习《药物化学》中氢化可的松的结构特征、肾上腺皮质激素类药物的结构特点和主要性质；复习《分析化学》熟悉高效液相色谱法中外标法的原理及操作。 氢化可的松的结构和性质： 1、结构中有共轭体系，具有紫外吸收。 2、氢化可的松松3号位上有羰基，可以和生物碱发生沉淀反应 3、四号位上有双键，可以被高锰酸钾氧化，也可与溴水发生加成反应。 4、11位的羟基可与酸酐或酰氯成酯，利用酯具有一定的熔点，可进行熔点测定，其酯在碱性条件下再与羟胺作用，生成异羟肟酸，并与高铁离子在酸性条件下络合，显紫红色。 5、此结构与硫酸、磷酸、高氯酸等作用呈色。 6、α-醇酮基与碱性酒石酸铜试液反应生成砖红色的氧化亚铜沉淀. 思考 【思考题】 1、试述内标法的特点？ 2、内标物质如何选取？ 谢 谢！