威格拉斯生物技术(北京)有限公司 高效真核转染试剂 - ( VigoFect.pdfVIP

威格拉斯生物技术（北京）有限公司 高效真核转染试剂 ( VigoFect ) 产品说明： 本试剂采用一类阳离子非脂性物质为主的配方，可以与DNA形成稳定的复合物，透 过细胞膜进入细胞内，并保护DNA免受核酸酶的降解。该试剂对细胞毒性很小，可 在含血清与抗生素的完全培养液中充分发挥作用。对多数培养细胞种类都有较高的 转染效率（不同种类细胞的转染效率可有明显差异）。此类试剂是目前非病毒介导 方法中效率最高的转染试剂。 产品内容与储存方法： 名称 数量 保存条件 VigoFect 0.4 ml 4℃ 可进行200次转染（6孔板或35 mm平皿）。常温运输，4℃保存。有效期6个月。 所需其它试剂： 使用者需准备150 mM NaCl （超纯水配制，高压或过滤灭菌）或注射用生理盐水作为 VigoFect及DNA的稀释液，和要转染的DNA溶液（高纯度，浓度0.1~2 μg/μl ）。 操作方法： 准备培养细胞： 1) 转染前24小时，接种适量细胞（接种数量可参考附表）。至转染时细胞密度以 40~60%为宜（80~90%亦可）。 2) 转染前1小时，更换新鲜的完全培养液（体积可参考附表），置37℃，5% CO2 培 养。 配制转染工作液： （6孔板或35 mm平皿，2 ml培养液） 3) 取5~8 μg DNA （起始用量5 μg ），加入稀释液中至总体积为100 μl，轻轻混匀，室 温放置。 4) 取VigoFect 1~4μl （起始用量2 μl ），加入稀释液中至总体积为100 μl，轻轻混匀， 室温放置5分钟。 5) 将稀释的VigoFect逐滴加入稀释的DNA溶液中，轻轻混匀，所得的转染工作液在室 温放置15分钟。 6) 将转染工作液轻轻混匀，逐滴加入2 ml培养液中，轻轻混匀培养液，置37℃，5% CO2 培养。 细胞后续处理： 7) 24~48小时后，观察或收取细胞。 8) 稳定转染时，于转染后24~48小时消化细胞分至3~5个培养皿中，加适当浓度的相 应抗生素（如G418 ）筛选。 电话：（010 （010 传真：（010 网址： 电子邮件：runon@ 威格拉斯生物技术（北京）有限公司 注意事项： 1) 少量使用Vigofect时，可取精确量的VigoFect用无菌超纯水稀释一定倍数，以便精 确取样量。该稀释液可在4℃保存1月左右。 2) 细胞的生长状态是转染效率的一个主要决定因素。在实验条件许可的情况下，使 用高质量的培养液、优质血清等，可能会明显提高转染效率。 3) DNA和VigoFect 的混合比例，决定了形成复合物的颗粒大小和性质；复合物颗粒 的大小和性质，对细胞的DNA吸收能力有重要影响。不同细胞达到最佳转染效率 ，所需复合物的颗粒大小、性质和数量，可能又有微小或很大差异。 提高转染效率的方法： 1) 使用高质量、高纯度的质粒DNA 。 2) 转染时细胞应处在生长旺盛状态。 3) 从起始用量开始，调整配制转染液中DNA和VigoFect 的用量（保持转染工作液总 体积不变），以确定不同细胞的最佳转染条件。一般固定DNA用量（5 μg ），与 系列含量的VigoFect混合，选取