单增李斯特菌nox基因的克隆、表达以及功能.PDF

46 2017, Vol.38, No.02 食品科学 ※生物工程 nox 单增李斯特菌 基因的克隆、表达以及功能 1 1 1 2 1 1 1 1,* 吴 嫚 ，李 森 ，陈国薇，罗 勤 ，刘武康，丁承超，董庆利，刘 箐 （1.上海理工大学医疗器械与食品学院，上海 200093 ；2.华中师范大学生命科学学院，湖北 武汉 430079 ） 摘  要： GenBank Listeria monocytogenes Lm EGDe nox GenBank 以 中报道的单增李斯特菌（ ， ）野生型菌株 的 基因（ ID 986631 Lm ： ）为研究对象，探讨在高等动植物中普遍存在的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶在 中是否也可以 reactive oxygen species ROS nox BL21 Nox 介导产生活性氧（ ， ）。首先通过诱导 基因在 中表达产生 蛋白，利用十二烷 - Western blot EGDe-nox ROS 基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳和 鉴定该蛋白质分子质量；然后构建过表达菌株 ，测定 产 - nox Lm 生情况，并使用实时荧光定量 聚合酶链式反应检测 基因的过表达对 毒力基因表达的影响。结果表明，经鉴定 Nox 33 kD EGDe-nox EGDe ROS nox 蛋白分子质量约为 ，过表达菌株 与对照组 的 产生量相比并无多大变化， 基因的过表达 actA inlA inlB prfA Nox ROS 会导致与侵袭相关的基因 、 和 以及毒力基因 的表达上调。由此推测，该 蛋白不能独立主导 的 Nox 产量，但其过表达却可以增强毒力基因表达上调。本研究为继续探讨细菌中 的作用提供一定的参考依据。 nox 关键词：单增李斯特菌；烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶； 基因；活性氧 Gene Cloning, Expression and