重组自噬标志分子LC3的抗血清制备.pdfVIP

ISSN 中国生物化学与分子生物学报 2007 年 6 月 CN 　113870Q Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology 23 (6) :508～512 ·研究简报· 重组自噬标志分子 LC3 的抗血清制备 赵振东 , 　曾庆江 , 　陈丽娜 , 　宋泉声 , 　陈英玉 (北京大学医学部免疫学系 ,北京　100083) ( ) 摘要 　自噬 autophagy 是胞内蛋白等大分子或细胞器直接或间接与溶酶体结合 ,从而得以降解的 β( β 过程. 微管相关蛋白 1 轻链 3 microtubuleassociated protein 1 light chain 3 , MAP1LC3 Ⅱ, 简称 LC3) ,是在高等真核细胞中发现的第一种自噬体膜蛋白 ,可以作为自噬的标志性分子用于检测自 噬活动. 为深入研究自噬的发生过程及其与健康和疾病的关系 ,通过构建 pET28a ( + ) LC3 原核表 达系统 ,应用多聚组氨酸结合树脂分离和纯化了重组 LC3 蛋白 , 以该蛋白为免疫原制备了抗LC3 的抗血清 ,并利用 HeLa 细胞自噬模型采用 Western 印迹方法对该抗血清的特性进行了鉴定. 结果显 示 ,兔抗LC3 抗血清同时可以识别 LC3 的2 个亚型 LC3 Ⅰ和LC3 Ⅱ,且可清晰检测到自噬发生时 LC3 Ⅰ向LC3 Ⅱ的转化,表明该血清可以用于自噬的检测. 关键词 　自噬; 微管相关蛋白 1 轻链 3 ; 抗血清 中图分类号 　R392 ;Q78 Prokaryotic Expression of Recombinant LC3 , a Molecular Marker of Autophagy , and Development of Its Antiserum ZHAO ZhenDong , ZENG QingJiang , CHEN LiNa , SONG QuanSheng , CHEN YingYu ( Departemt of Immunology , Peking University Health Science Center , Beijing 　100083 , China) 　　细胞的新陈代谢过程存在着蛋白质等大分子的 度的自噬过程的发生可引起非细胞凋亡的细胞程序 合成与降解以及细胞器的更新. 降解细胞内物质的 性死亡 ,现在已被称作 II 型细胞程序性死亡 ,也叫 ( ) ( 途径有两条 , 一个是通过蛋白酶体 proteasome , 一 自噬性程序性细胞死亡 autophagic programmed cell 个就是自噬[1 ] . 自噬是指胞内蛋白等大分子或细胞 death) [4～8 ] . 研究表明 , 自噬既可促进机体健康,又可 器直接或间接与溶酶体结合 , 从而得以降解的过 与各种疾病状态相联系 ,如肿瘤、神经退行性疾病、 程[1 ,2 ] . 根据胞内物质到达溶酶体的途径不同 , 自噬 肌病、发育和衰老[9 ,10 ] . 最近的研究表明 , 自噬可以 [3 ] ( ) 通过