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几种家畜淋巴细胞培养 方法和染色体组型 吕 群 江绍慧 何银瑛 吴观仁 (复旦大学遗传研究所) 上(海食品公司中心实验室) 随着工农业生产的飞跃发展,我国对家畜 培养液的配制和分装均需在无菌条件下进 遗传育种、家畜疾病防治、家畜饲养管理等方面 行。 都已开展了很多有意义的研究。在这些研究 三()血液样品的采取及培养 中,有时为了确定家畜品种在遗传结构上的变 剪去动物颈部局部区域的鬃毛,用碘酒、酒 异情况,常常需要对作为遗传物质基础的染色 精先后消毒。把预先消毒过的针筒 针(头要长 体进行观察和分析。 为此,我们以正常猪 而粗,一般用10号)用肝素湿润,每头动物抽取 (Susscrofadomesticus)、牛 归ostaurusLinn), 颈静脉血 ,毫升,换上7号针头,在酒精灯火焰 羊 O(viscries)的外周血淋巴细胞为材料,应用 旁小心穿人培养瓶的橡皮塞,每瓶培养液中滴 简便的半微量外周血培养方法,分析了正常猪、 人血样0.5毫升,将瓶子略加摇动,使滴入的血 牛、羊的染色体组型。现将有关方法和结果报 液与培养液均匀混合,在38.5-39.5℃恒温箱 告如下。 中培养 “-72小时。 (四) 细胞学技术 培 养 方 法 培养终止前4-6小时加秋水仙素,使每瓶 依据Tip,等[21[和项维等[1][简便的半微量外 培养物的最终浓度为0.4-0.8微克/毫升。放回 周血培养方法,采用 RPMI1640培养液进行培 温箱继续培养72小时。取出培养瓶,用吸管吸 养。 去上层培养液,余留培养液和培养物1毫升左 (一) 培养液的配制 右,加入预温过的蒸馏水8毫升,用吸管轻轻冲 称10.5gRPMI164。粉末,溶解在1,000毫 打均匀,放人温箱中处理25分钟。移人离心 升双重蒸馏水中,用赛氏细菌滤器过滤除菌 滤( 管,1000转/分离心7分钟。吸尽上清液,留在 板用醋酸纤维素醋,孔径为0.3微米)。使用时, 管底的细胞团用三份甲醇对一份冰酷酸的固定 80毫升 1640培养液,加人20毫升小牛血清, 液固定 1弓分钟,再用比例倒置的固定液,即一 、毫升植物凝血素’PHA 用(简便的盐水方法 份甲醇对三份冰醋酸固定15分钟。然后离心, 提取的),2毫升肝素 (500单位/毫升),再加青 转速同上。吸去固定液,另加3-4滴新鲜固定 霉素、链霉素各10,000单位。最后用 3.50o 液,用吸管将细胞团冲散均匀,做成细胞悬浮 NaHC03调节培养液 pH至 7.2-7.5。 液。事先将玻片放在冰箱的冰格中,将一滴细 二() 培养液的分装 胞悬浮液滴在有一层薄冰霜的载玻片上。细胞 配好的培养液分装在20毫升容积的小口玻 在载玻片上很快分散铺开,吹干。用pH7.4的 璃瓶中。每瓶装5毫升,用反口橡皮塞塞紧,保 磷酸缓冲液稀释的 Giemsa染色1小时,用自 存在。℃条件下备用。 使用前需放在370C温 来水轻轻冲洗,吹干,便可进行显微镜观察。 箱中温育20分钟。 用上述方法培养的猪、牛、羊外周血淋巴细 2 〕‘ 胞,染色体中期分裂相较多。我们随机作了统 一() 猪染色体组型 计,在猪的外周血培养物中,50个视野 (80倍) 家猪外周血淋巴细胞染色体的数目2,二 平均每一视野

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