色谱联用技术精要.pptVIP

色谱联用技术在生药学研究中的应用 色谱联用技术，就是采用色谱技术将复杂体系加以分离，再用红外光谱、质谱或核磁共振等波谱学或光谱学等的技术分别提供其结构信息，这为复杂体系的分离分析研究提供了一种具有发展前景的新技术。色谱联用技术包含了多种联用方式和技术，色谱方法主要包括高效液相色谱(HPLC)、气相色谱(GC)、毛细管电色谱(CEC)和高效毛细管电泳(HPCE)等几种分离手段同四大谱即质谱、核磁共振、红外、紫外光谱的分别联用组成了色谱联用技术的丰富内涵，此外还有与其他技术的联用应用。 由于对复杂体系分析信息量的要求日益增高，各种联用均得到较大发展，其中最引人注目的是色谱与质谱的成功联用，主要包括气相色谱—质谱(GC／MS)和液相色谱—质谱(LC／MS)。另外，正处于快速发展阶段并广泛应用的色谱联用技术包括气相色谱／傅立叶变换红外光谱(GC—FTIR)、气相色谱／原子光谱(GC—AS)、液相色谱／电感耦合等离子体质谱(HPLC-ICP—MS)、液相色谱／二极管阵列检测／质谱／质谱联用(LC—DAD—MS-MS)、毛细管电泳／质谱联用(CE-MS)等。 本文着重介绍液质联用与气质联用。 1液相色谱与质谱联用技术 HPLC - MS 主要由高效液相色谱仪、接口、质量分析器、真空系统和计算机数据处理系统组成。混合样品通过液相色谱系统进样 ,由色谱柱分离。从色谱仪流出的被分离组分依次通过接口进入质谱仪的离子源处并被离子化 ,然后离子被聚焦于质量分析器中 ,根据质荷比而分离 ,分离后的离子信号被转变为电信号 ,传送至计算机数据处理系统 ,根据质谱峰的强度和位置对样品的成分和结构进行分析 。 目前常用的 HPLC-MS联用仪具有两大分类系统,一种是从质谱的离子源角度来划分,包括电喷雾离子(ESI),大气压化学电离(APCI)和基质辅助激光解吸离子化 (MALDI) 等;另一种是从质谱的质量分析器角度来划分,包括四级杆质谱仪(Q - MS) ,离子阱质谱仪(IT - MS),飞行时间质谱仪(TOF - MS),傅立叶变换质谱仪(FT - MS)。从离子源角度来看,ESI从去除溶剂后的带电液滴形成离子,具有多电荷能力,所以其分析的分子量范围很大,既可用于小分子分析,又可用于多肽、蛋白质和寡聚核苷酸分析,尤其适用于在溶液中已形成离子的化合物或能够带多电荷的生物大分子的分析。 1.1在中药指纹图谱研究中的应用 张尊建等采用 HPLC-UV-MS 法对密花石斛进行指纹图谱研究，标示了 9 个共有峰，对其部分色谱峰进行了初步定性，有泽兰内酯、鼓槌联苄、大黄素或芦荟大黄素等。此外，他们还采用 HPLC-UV-MS 法对忍冬和山银花药材进行指纹图谱的研究，确认了忍冬指纹图谱中的 8 个色谱峰 ( 熊果酸、绿原酸、十三烷酸、香芥酚、corymbosin、3-甲基-4-羟基肉桂酸、异绿原酸、丁香酚等 ) 和山银花图谱中的 5 个色谱峰 ( 绿原酸、香芥酚、丁香酚、异绿原酸、咖啡酸等 )，并比较了2种药材指纹图谱的差异。 马欣等应用 HPLC-DVD-MS2 法建立了银杏叶提取物的多维指纹图谱，同时建立了质谱总离子流(TIC) 指纹图谱，检测了银杏叶中四种有效成分 ( 黄酮和内酯类化合物 )。样品经前处理后，应用 Agilent HPLC 色谱条件和 API-ES-MS 条件分析了法国、香港、山东等 10 个厂家样品。结果提取物的 HPLC 有 33 个峰，MS 总离子流有 51 个峰。并以芦丁为参照物，计算了样品的相似度。 1.2在中药结构鉴定中的应用 卢定强等用 HPLC-ESI-MS 法分析银杏叶中银杏萜内酯的成分和含量，鉴别出白果内酯和银杏内酯 A，B，C，J。孙秀燕等采用 ESP-IT-MS 对滨蒿中利胆保肝活性成分进行了分离和结构鉴定，鉴定出滨蒿中的利胆有效成分除含有绿原酸、对羟基苯乙酮、6，7- 二甲氧基香豆素外，还首次分离鉴定出具有保肝活性的茵陈色原酮。Miketova 等利用 HPLC-ESI-MS 技术对绿茶提取物直接进行分析，结合不同化合物的相对分子质量和保留时间信息，可对所含的儿茶酸类进行有效鉴定。He 等 同时利用 HPLC-MS 和 HPLC-DAD 成功地对姜的辛辣成分与含油树脂提取物进行了成分分析，根据紫外吸收光谱和质谱结果，成功地鉴定了其中 7 个化合物结构，并分析推测了其他 2 个未知成分的结构。Wolfender 等认为 HPLC-TSP-MS 适用于中等极性的化合物，如多酚类，萜类化合物；恒流快原子轰击接口及 ESI 接口更适合于分析相对分子质量和极性较大的化合物。 1.3在中药定量分析中的应用 HPLC-MS 与多级反应监测技术结合可进行天然药物提取物中成分的定量分析。其具有高灵敏度、高选择性，适用于对热不稳定化合物的分