产低温脂肪酶菌株Geotrichum candidum ch-3的选育、发酵条件及酶学性质研究.pdfVIP

维普资讯 中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology，2007，27(10)：22—27 产低温脂肪酶菌株 Geotrichumcandidum ch-3的 选育、发酵条件及酶学性质研究米 付建红 石玉瑚 欧阳平凯 王俊华 (1南京工业大学制药与生命学院 南京 210009 2新疆农业科学院微生物应用研究所 乌鲁木齐 830091) 摘要 从新疆昌吉市油脂化工厂的含油冻土中筛选到一株产低温脂肪酶的菌株 ch-3，形态鉴定 及 18SrDNA序列分析表明该菌株为白地霉，命名为Geotrichumcandidumch-3。对其生长及产酶情 况和酶性质做 了初步研究。该菌株的最适生长温度是 20℃。玉米浆、豆油可显著促进脂肪酶的 产生。粗酶液经双水相萃取和SephadexG-75凝胶过滤分离纯化后进行酶学性质的研究。该脂肪 酶最适作用温度为35℃，在0℃可保持66％的相对酶活性，最适pH值为7．0，对热较敏感，50℃处 理20min，剩余酶活为55％，Fe¨、Cu¨、Mn 以及Ca 对酶有较强的激活作用。 关键词 新疆 白地霉 低温 中性脂肪酶 中图分类号 Q813 新疆是我国西北内陆省区，具有独特的自然环境，其 寒地区微生物低温酶的低温适应机制及其应用打下一 中干旱和低温是其两个显著的特点，这样的特殊环境下 定的工作基础。 蕴藏着大量丰富的低温微生物资源。研究、开发该地区 1 材料与方法 低温微生物资源及其相应的低温酶类具有重要的现实意 义。低温酶在工业上的应用优势在于酶的活化能和反应 1．1 菌 种 最适温度较低，可以节约能源和保护环境。同时在食品 菌株 ch-3分离 自新疆昌吉市油脂化工厂的含油冻土。 工业和热敏反应中，可利用低温酶热稳定性差的特性保 1．2 培养基 护食品和反应产物在酶热失活时免遭破坏_J J。 1．2．1 富集培养液 橄榄油20g，蛋白胨5g，牛肉膏 脂肪酶是一种广为应用的工业用酶，它在不同的 5g，(NH4)2SO45g，MgSO4 ·7H200．5g，K2HPO44g， 反应体系下可催化多种反应，如水解、酯化、转酯及酯 KH2PO4lg，CaC120．5g，加水至 1000ml，pH7．5，112~C 类手性合成等。低温脂肪酶可在较为低温的环境下催 灭菌30min。 化这些反应，因而在洗涤、食品、环保等领域有着广阔 1．2．2 脂肪酶产生菌筛选培养基 (NH4)2SO41g， 的应用前景_2，3l。目前国内外研究较多的是海洋、极 K2HPO4 1g，KC1lOg，MgSO4 ·7H20 0．5g，FeSO4 ‘ 7H2O0．Olg，琼脂 20g，加水至 1000ml，112~C灭菌 地环境下的低温菌及其产生的低温酶，对内陆高寒地 30min。分别取橄榄油和聚乙烯醇以 1：3比例混合 ， 区(如新疆)的低温菌研究的较少，而且有关 白地霉产 lO000r／min搅拌乳化5min，高压灭菌后取 12ml加入到 生低温脂肪酶的研究尚未见报道。本文从新疆昌吉市 lOOml上述培养基，混匀即可。 油脂化工厂冰冻的含油土壤中分离到 l2株脂肪酶产 1．2．3 罗丹明B定性培养基 将罗丹明B溶解于去 生菌，其中白地霉 ch-3酶活力较高，本文对其生长与产 离子水中，使其终浓度为 1m ml，过滤除菌。基础