少棘蜈蚣活性蛋白提取及纤溶作用性质研究.docVIP

　　少棘蜈蚣活性蛋白提取及纤溶作用性质研究 作者：刘兵，谭竹钧，陈明军，刘浩，陈雅雄 【摘要】 　　目的研究少棘蜈蚣活性蛋白的纤溶性及其性质。方法通过硫酸铵分段盐析、DEAE纤维素柱和Sephadex G-75柱层析从少棘蜈蚣Scolopendra subspinipes mutilans L. Koch组织分离纯化出纤溶性活性蛋白，纤维蛋白平板法测定其纤溶性，SDS测定样品纯度和分子量，温度、pH改变对少棘蜈蚣纤溶性蛋白活性的影响。结果分离纯化到一种相对分子质量约为48.3 kD的纤溶性蛋白，水解纤维蛋白的比活力为42.36 u/mg。结论少棘蜈蚣活性蛋白具有纤溶性，该成分在40℃下基本稳定，最适温度35℃，最适pH8.0。 【关键词】 少棘蜈蚣 活性蛋白 分离提取 纤溶活性 　　Abstract：ObjectiveTo study the fibrinolytic activity of the active protEin of Scolopendra sulspinipes multicans.MethedA novel of fibrinolytic protEIn monium suplhate sub-precipitation, DEAE-cellulose and SephadexG-75 column chromatography from the tissue of the Scolopendra subspinipes mutilans L. Koch. ResultThe protein shoolecular dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis analysis. Its specific activity to hydrolyze fibrin g. The activity of enzyme ethanesulfonyl fluoride (PMSF), but inotetraacetic acid (EDTA). CorclusionThe protein is stable under 40℃, the optimum temperature is 35℃, and the optimum pH is 8.0. 　　Key utilans L. Koch; Active protein; Purification; Fibrinolytic activity 　　蜈蚣属陆生节肢动物，是我国传统的中药材之一。目前蜈蚣药材主流商品为少棘蜈蚣，产量约占95％，少棘蜈蚣Scolopendra subspinipes mutitans全虫入药，已有二千多年的使用 历史 ，有熄风解痉、消肿解毒的功能，主治小儿惊风、破伤风、抽搐、口眼歪斜、淋巴结结核、肿毒疮疡等。对其活性蛋白研究有利于进一步探索其药用作用机理，纤溶活性研究为进一步研究其溶栓和抗癌活性奠定基础。 　　1 材料与仪器 　　1.1 药材 　　少棘蜈蚣Scolopendra subspinipes mutilans L. Koch购自安徽滁州大丰养殖场，由谭竹钧教授对其进行种类鉴定，挑取活体于-80℃冰箱中冻存。 　　1.2 仪器 　　自动柱层仪(包括梯度混合器、横流器、自动部分收集器、紫外检测仪、小型台式记录仪)，上海沪西分析仪器厂有限公司产品；pH计［梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司，其精度为±0.01pH］；高速冷冻离心机（KDC-160HR，科大创新股份有限公司中佳分公司）；TU-1901双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；真空冷冻干燥器（LABCONCO，美国）；HHS电热恒温水浴锅（上海博泰实验设备有限公司）；DYY－Ⅲ稳压稳流电泳仪和DYY－Ⅲ28垂直夹芯电泳槽（北京六一仪器厂）。 　　1.3 试剂 　　Sephadexg-75，台州市路桥四甲生化塑料厂出品；DEAE-32，广东省汕头市西陇化工厂分装；十二烷基硫酸钠（SDS），天津市瑞金特化学品有限公司产品；丙烯酰胺，天津市大茂化学试剂厂产品；考马斯亮蓝R-250、G-250，北京鼎国生物技术有限责任公司产品；牛血清白蛋白（BSA），牛血纤维蛋白原sigma-F8630、凝血酶sigma-T4648，广州宽林仪器科技有限公司产品；尿激酶， 中国 药品生物制品检定所提供。 　　 2 方法 　　2.1 少棘蜈蚣粗提物的制备［1］ 　　取-80℃冻死的新鲜蜈蚣16条，4℃冰箱中解冻后称重46.72g，剪刀绞碎于研钵中研磨至糜状，按ol/L磷酸钠缓冲液(pH7.6)， 4℃冰箱中浸提过夜。4 000 r/min，4℃离心15 min，去沉淀，16层砂布过滤，上清液加固体硫酸铵分