2免疫磁珠技术的应用.ppt

2.1.5 副溶血性弧菌的检测 Hara-Kudo等利用IMS和显色培养基分离贝类中产TDH的副溶血性弧菌O3:K6。Datta等利用副溶血性弧菌ATCC17802制备针对极鞭毛的单克隆抗体,这将有益于快速检测从环境来源的副溶血性弧菌。张凡非等利用IMS分离环境及食品中产生TDH副溶血性弧菌，分别从1份 海水、1份海泥和3份蛤肉中检出了神奈川现象阳性,并产生耐热溶血毒素的副溶血性弧菌,血清型为03:K6。 IMB技术优点 　该方法与一般的细菌培养分离法相比,极大地提高了环境样品及食品中病原性副溶血性弧菌的检出率。利用IMS可有效地吸附、浓缩大量样品中的少量病原微生物, IMS为难于从环境及食品中分离病原性副溶血性弧菌的问题提供一种有效手段。 2.1.6 其他致病菌的检测 志贺氏菌 例：Islam等应用O抗原特异性单克隆抗体包被免疫磁珠，快速检测粪便中的疾痢志贺菌和福氏志贺菌。分离出的志贺菌株用PCR扩增方法进行鉴定。此种免疫磁珠分离与PCR联合法检测志贺菌，较传统的培养法敏感、快速(7 h)。 小肠结肠炎耶尔森氏菌 例：Kapperud等用抗小肠结肠炎耶尔森氏菌血清抗体包被磁性微球，从食物和水样中分离，并能将小肠结肠炎耶尔森氏菌与假结核耶尔森氏菌和非致病性耶尔森氏菌区别开来。 2.2免疫磁珠与其它检测手段的联用 2.2.1 免疫磁珠与PCR的联用 鉴于PCR 技术灵敏度较低这一缺点，将免疫磁珠技术和PCR 技术相结合，建立了新的检测系统—— 磁免疫PCR。例如：它以李斯特氏菌单抗包被磁珠，对样品进行前处理，将菌进行富集裂解，再以iap 基因的保守区域设计引物进行PCR结果显示该方法具有良好的特异性，而且十分灵敏。 2.2.2 免疫磁珠与ELISA的联用 利用磁性微球，并以兔抗甘草蛋白IgG抗体致敏，制备特异性捕获甘草特征蛋白的免疫磁性微球。以生物素标记抗体为示踪抗体，结合辣根过氧化物酶标亲和素建立ELISA检测系统，用于甘草药材和含甘草中成药中甘草蛋白的分析。结果 用该方法对甘草药材和中成药中甘草蛋白抗原检测，检测灵敏度10ng／mL。免疫磁性捕获ELISA检测技术方便、快速、准确，为生药的品种鉴定及中成药的质量控制提供一种新方法。 2.2.3 免疫磁珠与发光检测手段的联用 发光手段分析包括荧光免疫分析、电化学发光分析等。 免疫磁珠荧光微球 2.3 IMB技术在其他领域中的应用 2.3.1免疫检测 IMB技术不仅应用于食品中有害微生物的检测，它在医学领域也有广阔的应用前景，它可以检测肿瘤细胞，如骨髓中肿瘤细胞的检测和淋巴结中肿瘤细胞的检测。另外这种技术还可以对肿瘤进行磁导向治疗和免疫磁性净化治疗。 2.3.2 细胞分离 细胞分离是免疫磁珠目前应用最主要的一个方面，传统细胞分离技术有的比较费时，有的十分昂贵，由于免疫磁珠技术分离细胞时只需要抗体和磁铁，既简便灵敏又经济快捷。 分离细胞有两种方式，用免疫磁珠直接从细胞混合液中分离靶细胞的方法称为阳性分离，用免疫磁珠去除无关细胞使靶细胞得以纯化的方法称为阴性分离。 马东初用GPⅡb/Ш a血小板单克隆抗体结合磁珠分离人骨中的巨核细胞，其纯度达到87.5%到97.1%，且50%的巨核细胞具有生物活性，且磁珠分离的巨核细胞超微结构保持完整，可用于巨核细胞的细胞生物学和分子生物学等方面的研究。 2.3.3 生物大分子纯化 　 免疫磁珠可以看作是亲和层析技术中的微型配基，体，在基质上固相化抗体或抗原后，形成特异性吸附后，再进行磁性亲和抽屉不需离心过滤，用于分离和纯化相应的生物大分子。为提纯受体分子、DNA、RNA、DNA结合蛋白及mRNA等提供希望。 2.3.4 分子生物学的应用 免疫磁珠可借助亲和素——生物素系统与非蛋白结合（如各种DNA、RNA大分子）。先将PCR双链产物与生物素化的磁珠混合使两者结合，然后进行碱性变性处理，使PCR双股DNA成为单股DNA，可直接快速用于检测PCR样品中DNA或RNA分子并可进行测序。 2.4 IMB技术优缺点及发展方向 优点:分离速度快、效率高、可重复性好、操作简单，不需要昂贵的仪器设备,不影响被分离细胞或其它生物材料的生物学性状和功能等,从而在微生物检测方面具有很大的优势。 　但在IMB应用过程中,目前仍然存在着一些问题: 　1、进口的免疫磁珠价格昂贵,而国产的磁珠在敏感性等方面还需要进一步的实验改进。 　2、免疫磁珠分离方法的特异性与所用的抗体密切相关,有可能不能避免与其他杂菌交叉反应,因此也需要辅助其他方法同时进行检测,如选择性分离平板、发酵实验及PCR等。另外,免疫磁珠分离方法与显色培养基相结合的检测也会是一个趋势。 免疫磁珠技术（IMB）在食品有害