miR-34a通过Notch1信号通路对肺癌干细胞的抑制教程.docVIP

www.CRTER.org 韩纪昌，等. miR-34a通过Notch1信号通路对肺癌干细胞的抑制 www.CRTER.org 韩纪昌，等. miR-34a通过Notch1信号通路对肺癌干细胞的抑制 PAGE 3356 P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org PAGE 3 P.O.Box 1200,Shenyang 110004 k 中国组织工程研究 第20卷 第23期 2016–06–03出版 www.CRTER.org Chinese Journal of Tissue Engineering Research June 3, 2016 Vol.20, No.23 ·研究原著· PAGE 3349 ISSN 2095-4344 CN 21-1581/R CODEN: ZLKHAH miR-34a通过Notch1信号通路对肺癌干细胞的抑制 韩纪昌，张祎捷，李红兵，杨存葆，马超楠，戚冠斌(河南大学淮河医院呼吸内科，河南省开封市 475000) 引用本文：韩纪昌，张祎捷，李红兵，杨存葆，马超楠，戚冠斌. miR-34a通过Notch1信号通路对肺癌干细胞的抑制[J].中国组织工程研究，2016，20(23):3349-3356. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.23.001 ORCID: 0000-0001-8450-019X(张祎捷) 文章快速阅读： miR-34a及Notch1在肺癌干细胞增殖和凋亡中的作用 韩纪昌，男，1977年生，山东省莒南县人，汉族，2004年广东医学院毕业，硕士，副主任医师，主要从事肺癌相关研究。 通讯作者：张祎捷，硕士生导师，主任医师，河南大学淮河医院呼吸内科，河南省开封市 475000 中图分类号:R394.2 文献标识码:A 文章编号:2095-4344 (2016)23-03349-08 稿件接受：2016-04-19 人肺腺癌细胞株A549细胞的培养 免疫磁珠分选技术 CD133+肺癌干细胞 过表过miR-34a 基因敲除Notch1 流式细胞仪检测细胞凋亡 MTT检测细胞增殖 miR-34a通过Notch1信号通路影响肺癌干细胞增殖和凋亡 双荧光素酶报告基因检测miR-34a与Notch1的靶向关系 Western blot检验Notch1蛋白表达 文题释义： 微小RNA：microRNA(miRNA)是一类内源性非编码单链小分子RNA，长度一般为18-25个核苷酸。成熟的微小RNA可以与靶mRNA的3’端非翻译区特异性结合，促使靶蛋白mRNA降解或抑制其翻译，最终使内源基因表达得到调控。miRNA广泛参与细胞的增殖、分化、凋亡等过程的调节，几乎所有恶性肿瘤发生过程中都存在miRNA的异常表达。 Notch信号通路：Notch信号通路广泛存在于脊椎动物和非脊椎动物，在进化上高度保守，通过相邻细胞之间的相互作用调节细胞、组织、器官的分化和发育。该通路由Notch受体、Notch配体、CSL-DNA、其他的效应物和Notch的调节分子等组成。Notch信号通路的激活是多种癌症发生的重要因素，并调控多种肿瘤干细胞的自我更新及存活过程。 摘要 背景：已有报道证实miR-34a对肺癌干细胞有一定的抑制作用，但是其作用机制目前还不清楚。 目的：探索miR-34a对肺癌干细胞的抑制作用及机制。 方法：应用免疫磁珠分选细胞技术从肺腺癌A549细胞系中分离出CD133+肺癌干细胞；脂质体转染技术构建miR-34a过表达的肺癌干细胞；双荧光素酶报告基因分析miR-34a与Notch1的靶向关系；基因敲除Notch1并检测其对肺癌干细胞的影响。 结果与结论：①经过免疫磁珠分选和流式细胞术检测得到高比率的CD133+肺癌干细胞；②qRT-PCR检测发现miR-34a在CD133+肺癌干细胞中的表达明显低于CD133-肺癌细胞；③成功构建miR-34a过表达的肺癌干细胞，发现miR-34a能够抑制肺癌干细胞的增殖，诱导细胞凋亡；④双荧光素酶报告基因分析证明Notch1与miR-34a具有靶向关系；⑤基因敲除Notch1显著抑制肺癌干细胞的增殖，诱导细胞凋亡；⑥结果提示，miR-34a可能通过抑制Notch1信号通路来抑制肺癌干细胞的生长。 关键词： 干细胞；肿瘤干细胞；肺癌干细胞；miRNA；miR-34a；Notch1信号通路；Notch1；肺腺癌A549细胞；CD133+肺癌干细胞；增殖；凋亡