促红细胞生成素基因修饰的胎肝基质细胞促进.PDFVIP

生物化学与生物物理进展 ProgressinBiochemistryandBiophysics 2010,37(4):381~388 促红细胞生成素基因修饰的胎肝基质细胞促进 脐血 CD34 细胞向红系分化 * 杨超1)** 吉蕾1,2)** 施双双 1) 岳文1) 何丽娟 1) 南雪1) 裴雪涛 1)*** (1) 军事医学科学院输血医学研究所干细胞与再生医学研究室，北京 100850； 2) 中国科学院动物研究所，计划生育与生殖生物学国家重点实验室，北京 100101) 摘要 通过重组慢病毒系统感染人胎肝基质细胞(fetalliverstromalcells，FLSCs)，建立了能够稳定高效表达促红细胞生成素 (erythropoietin，EPO)的细胞株 EPO/FLSCs． 从胎儿肝脏克隆 EPO 基因，构建重组慢病毒 EPO 的表达载体，感染 FLSCs，根 据荧光表达强弱进行流式分选，???得能够继续稳定传代的高表达 EPO 基因的 FLSCs，RT-PCR 和 ELISA 结果证实，细胞株 中的 EPO 基因稳定表达．RT-PCR 结果显示， FLSCs 的 EPO 在 mRNA 水平的表达分别是未转染 FLSCs 和转染空载体 FLSCs 的 5.63 倍和 5.71 倍． ELISA 法检测了转染重组慢病毒 EPO 表达载体的 FLSCsEPO 蛋白表达水平，结果显示 EPO 蛋 白的表达水平也明显升高． 收集 EPO/FLSCs 的条件培养基，体外诱导脐血 CD34 细胞向造血细胞分化，结果显示向红系定 + 向分化的细胞比例明显居多，有可能为临床细胞治疗提供稳定、高质量的细胞来源． 关键词 胎儿肝脏，基质细胞，慢病毒，促红细胞生成素，转基因 学科分类号 R36 DOI: 10.3724/SP.J.1206.2009.00588 红细胞输注是目前临床细胞治疗的常用手段， 白的合成[5-8]． 近年来，随着基因工程技术的发展， 可以用来治疗恶性血液疾病、遗传性疾病、重症免 以及人们对基因重组促红细胞生成素(rh-EPO)研究 疫缺陷等疾病，尤其适用于自身免疫性溶血性疾病 的不断深入，rh-EPO 开始应用于肾衰、尿毒症伴 的患者、骨髓移植及既往有过输血反应的患者[1]． 随的贫血、人类免疫缺陷病毒(HIV)相关贫血和心 但血细胞来源短缺仍然是临床面临的主要问题之 肌梗死后的心肌损伤等临床疾病的治疗[9-12]． 不同 一，乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)等 组合的细胞因子能够促进造血干细胞体外扩增并向 病原体的污染也使临床用血的安全性受到了极大的 红系细胞分化[13-14]． 但各种细胞因子多为基因工程 挑战[2-3]． 因此，人们期望更为安全、有效的血细 产品，价格昂贵． 因此，人们一直期望建立一种高 胞资源． 随着干细胞研究及其相关领域生物技术的 效、经济的诱导造血干细胞向红系分化的方案． 本 快速发展，使得人类有可能在体外定向诱导干细胞 研究建立了转 EPO 基因的滋养层细胞，通过收集 分化为所需要的各种组织细胞以供临床应用[4]． 近 胎肝基质细胞