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2011年7月1.3常用酶切体系
酶切、连接与质粒构建; 连接酶
作用模式
连接产物
连接体系
产物的转化
;第一部分：限制性内切酶及酶切;1.1 限制性内切酶的简介;限制性内切酶可分为三类;1）用属名的头一个字母和种名的头两个字母表示寄主菌的物种名称，如E. coli 用Eco表示，所以用斜体字。 EcoRI， EcoRV。
2）用一个字母代表菌株或型，如流感嗜血菌(Heamophilus influenzae)Rd菌株用d，即Hind。
3）如果一种特殊的寄主菌株，具有几个不同的限制酶，则以罗马数字表示，如HindⅠ, HindⅡ，HindⅢ等。;（1）粘性末端：
如EcoRI的识别顺序为：
5’…… G↓AATTC ……3’
3’…… CTTAA↑G …… 5’
在双链上交错切割的位置切割后生成：
5’……G AATTC……3’
3’……CTTAA G……5’;例如EcoRV 的识别位置是：
5’…… GAT↓ATC …… 3’
3’…… CTA↑TAG …… 5’
切割后形成
5’…… GAT ATC …… 3’
3’…… CTA TAG …… 5’
;回文序列与非回文序列;酶切位点的查询;酶切位点的查询;同裂酶;同尾酶;1.2 限制性内切酶的选择;1.3 常用酶切体系-单酶切;1.3 常用酶切体系-双酶切;双酶切buffer;1.4 酶切的应用;1.5 酶切常见问题及对策; ① 如果DNA底物是从表达 Dam 或 Dcm 甲基化酶 的菌株中分离而得；
②且其甲基化识别位点与内切酶识别位点有重叠。
例如，从 dam+ E.coli 中分离的质粒 DNA 完全不能被识别序列为 GATC 的 MboI 所切割。;2）DNA切割不完全;3）DNA片段数目多于理论值;星号活性;第二部分：DNA的连接反应;2.1 连接酶; ; ;2.3 连接产物的形态;2.3 连接产物的形态;2.4 常用连接体系;2.5 连接产物的转化;第三部分：质粒构建; ;; ;3.1 重组质粒构建--粘性末端连接;2011年7月;2011年7月;2011年7月;2011年7月;2011年7月;构建多基因串联重组质粒; Red同源重组;腺病毒重组;2011年7月
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