壳聚糖铜固定化多酚氧化酶的研究.PDFVIP

第 20 卷第 2 期 林 　产 　化 　学 　与 　工 　业 Vol.20 No .2 2000 年 6 月 Chemistry and Industry of Forest Products June 2000 壳聚糖铜固定化多酚氧化酶的研究 雷福厚 (广西民族学院化学化工系 , 广西 南宁 　530006) LEI F .H. 2 + 摘　要 :　通过壳聚糖上的 — NH2 与 Cu 生成不饱合络 合物 , 以高分子 配位键 法 , 对 多酚氧化酶(PPO)固定化 , 实验结 果表 明这种 方法 是可行 的 。 固定 化多 酚氧 化酶的 最佳 pH 值为 6.24 , 在 70 ℃放置 25 min 后酶活力保留 31.1 %。 讨论了固定 化酶的重 复使用性 、米氏常数及底物对固定化酶的影响 。 关键词 :　壳聚糖 ;高分子络合物 ;多酚氧化酶 ;固定化 中图分类号 :Q 554+.9　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :0253-2417(2000)02-0023-04 壳聚糖是从蟹 、虾等甲壳动物的外壳中提取的一种氨基多糖 , 学名为 2-氨基-1 , 4 葡聚 糖 。它来源丰富 、制备简单 、化学性质稳定 , 耐热性好 。 壳聚糖作为固定化酶的载体已有一 些报道[ 1～ 3] 。 一般固定化酶方法是将壳聚糖与戊二醛发生 Schiff 反应 , 再以共价键的形式 对酶固定化 。本文研究的是将壳聚糖制备成壳聚糖铜高分子络合物 , 以配位键的形式对多 酚氧化酶进行固定化 , 其过程为 : enzyme 2+ 2+ p ～ NH2 +Cu P ～ NH2Cu P ～ NH2Cu-enzyme 2+ 壳聚糖上的 —NH2 可以与 Cu 形成高分子络合物 , 由于高分子键的刚性作用 , 此络合 物的 Cu2+配位未饱合 , 可以进一步与酶中的游离氨基酸配位 , 使酶以配位键的形式固定在 壳聚糖上 , 此方法称为高分子配位键法 。这种方法制备简单 , 固定化酶过程中酶损失少 。 1 　实验 1.1 　材料与试剂 壳聚糖 :浙江玉环化工厂 , 分子量 1.38 ×106 。 脱乙酰度 87 %, 其余试剂均为分 析纯 ; 721 分光光度计 :上海第三分析仪器厂 。 1.2 　多酚氧化酶的提取 取市售香蕉果肉约 300 g , 捣碎成糊状 , 移入烧杯 , 加入缓冲溶液 , 充分搅拌 、抽滤 , 滤液 收稿日期 :1999-07-09 　作者简介 :雷福厚(1965-), 男(土家族), 湖北建始人 , 副教授 , 硕士 , 从事有机 化学及 天然高 分子研 究 。 　24 林 　产 　化 　学 　与 　工 　业 第 20 卷 中加入硫酸铵 , 使之浓度为 35 g/100 mL, 抽滤 , 滤液中再加硫酸铵至饱合 , 沉淀过滤 。 为进 一步纯化酶 , 将沉淀用蒸馏水溶