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第四章 细胞培养研究技术;基本操作技术和要求;培养室内的无菌技术;培养细胞的 取材;皮肤和粘膜的取材;内脏和实体瘤的取材;血细胞的取材;鼠胚组织的取材;组织材料的分离;细胞悬液的分离方法;机械分散法;消化分离法;胰蛋白酶法;胶原酶法; 消化分离法;胰蛋白酶法;胶原酶法;EDTA法;第一节细胞的分离和纯化;一、成纤维型细胞的分离和去除;成纤维细胞样细胞 ;生长特点
排列成放射状,漩涡状
并不紧靠连成片,
细胞—细胞接触易断开而 单独行动
游离的单独的成纤维样细胞, 常有几个伸长的细胞突起
;(一)差速贴壁分离法;例1;培养细胞活力测定;2台盼蓝法;3 四唑盐(MTT)比色法;操作步骤
(1)单细胞悬液接种于96孔培养板;103-104细胞/孔,每孔培养基总量200微升(96孔培养板每孔容积370微升),37℃、5%
CO2培养箱中培???一段时间(根据实验目的决定培养时间)
(2)加入2毫克/毫升的MTT液(50微升/孔);继续培养3小时。
(3)吸出孔内培养液后,加入DMSO液(150微升/孔),将培养板置于微孔板扳荡器上振荡10分钟,使结晶物溶解。
(4)酶标仪检测各孔OD值(检测波长570纳米)。记录结果,绘制
;操作步骤
(1)单细胞悬液接种于96孔培养板;103-104细胞/孔,每孔培养基总量200微升(96孔培养板每孔容积370微升),37℃、5%
CO2培养箱中培养一段时间(根据实验目的决定培养时间)
(2)加入2毫克/毫升的MTT液(50微升/孔);继续培养3小时。
(3)吸出孔内培养液后,加入DMSO液(150微升/孔),将培养板置于微孔板扳荡器上振荡10分钟,使结晶物溶解。
(4)酶标仪检测各孔OD值(检测波长为570 nm)。记录结果,绘制细胞生长曲线
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