第二十章 高效液相色谱幻灯片1.pptVIP

第二十章 高效液相色谱;导 学;§20-1 概述;高压液相色谱法;分离原理;§20-2 高效液相色谱仪;一、高压输液系统;输液泵;. 　　对输液泵的基本要求 流量准确可调。流动相的流速在0.5-2mL/min，输液泵的最大流量一般为5-10mL/min。输液泵的流量控制精度通常要求小于±0.5%。 耐高压。高效液相色谱柱是将很细颗粒（3-10um粒径）的填料，在高压下填充到柱管中，为了保证流动相以足够大的流速通过色谱柱，需要足够高的柱前压。通常要求泵的输出压力达到30-60MPa的高压。 液流稳定。输液泵输出的液流应无脉动。 泵的死体积小。为了快速更换溶剂和适于梯度洗脱，泵的死体积通常要求小于0.5mL。泵的结构材料应耐化学腐蚀。 ;输液泵;脱气装置;梯度洗脱装置;梯度洗脱操作;(2) 梯度淋洗装置;二、进样系统;分离系统包括色谱柱、恒温器和连接管等部件。;填料的结构;四、检测器;检测器的分类;紫外-可见光检测器;二极管阵列检测器;;直接紫外检测： 所使用的流动相为在检测波长下无紫外吸收的溶剂，检测器直接测定被测组分的紫外吸收强度。 间接紫外检测： 使用具有紫外吸收的溶液作流动相，间接检测无紫外吸收的组分。 柱后衍生化光度检测： 对于那些可以与显色剂反应生成有色配合物的组分，可以在组分从色谱柱中洗脱出来之后与合适的显色剂反应，在可见光区检测生成的有色配合物。;示差折光检测器;荧光检测器;;蒸发光散射检测器 ;;三、影响分离的因素;1. 影响分离的因素——流速;2. 固定相及分离柱;液相色谱流动相;3. 流动相及流动相的极性;流动相组成;§20-3 液固色谱法;吸附色谱的分离机理; 吸附色谱概述;二、LSC固定相;流动相的选择;应用;1、脲和氨基甲酸酯的分离 硝基苯胺异构体的分离;§20-4 液液色谱法;分配色谱的分离机理;分配色谱概述;流动相;四、应用实例;§20-5 化学键合相色谱法;键合相色谱柱;一、化学键合固定相法;二、反相键合相色谱法;分离机制疏溶剂理论;三、正相键合相色谱法;反相HPLC;化学键合相色谱法的优点;§20-6 离子交换色谱法;应用;分离原理;离子交换树脂的分离机理;离子交换色谱概述;二、固定相;三、流动相;离子对色谱;离子对色谱;§20-7 排阻色谱法;一、分离原理;分离原理;;;二、排阻色谱的填料和流动相;三、应用;§14-8 色谱分离方法的选择;液相色谱的方法开发;第一步干什么?;分析时要了解哪方面的情况？;分离时要了解哪方面的情况？;一般的具体步骤;使用文献方法;反相色谱的方法开发;改变容量因子 K;改变选择性∶a;离子型化合物的分离方式;离子抑制色谱;常用缓冲液及其pH值;离子抑制色谱实例;离子抑制色谱的使用范围;离子对色谱法;离子对色谱机理;结论;毛细管电泳;毛细管电色谱;习 题;解：;习 题;解：; 二、气相色谱中流动相是惰性的，它对组分没有作用力，仅起运载作用，而高效液相色谱的流动相不仅起运载作用，而且流动相对组分有一定亲合力，可以通过改变流动相种类和组成提高分离的选择性，另外可作流动相的化合物多，选择余地广。 ; 三、与气相色谱相比，高效液相色谱的另一个优点是样品的回收比较容易，只要开口容器放在柱子末端，就可以很容易地将所分离的各组分收集。回收是定量的，可以用来提纯和制备具有足够纯度的单一物质。 ; 四、高效液相色谱不足的是，目前检测器的灵敏度不及气相色谱。必须特别注意“柱外效应”对柱效率及色谱分离的影??。