兽医病毒学实习七血液DNA的萃取.doc

PAGE \* MERGEFORMAT22 獸醫病毒學實習七:血液DNA的萃取 目的: 白血球為易感染病毒的來源。 一般當細胞被某些逆轉錄病毒(Retrovirus)感染時，像貓的白血病或雞的淋巴性白血病(lymphoid leukosis)會造成基因潛伏在白血球的基因體裏面，這就是所謂的Proviral DNA。 病毒的DNA可以與細胞的DNA同時萃取出來。 萃取出來的病毒DNA可以其他的方法如聚合酶鏈鎖反應來偵測。 了解血液分層現象以及什麼是buffer coat。 學習如何分離白血球與紅血球。 學習從白血球中分離出病毒proviral DNA。 ●血球分層現象 ●proviral DNA 藥品、儀器與設備 1. 振盪器 2. 水浴槽 3. 離心機 4. 電磁爐 5. 微量分注器 6. 離心管 7. 試管架 8. tray 9. 手套 10. TE buffer 11. DNA buffer (proteinase K + SDS) 12. EDTA 或是citrate 13. 受病毒感染之貓血液 方法與步驟 1. 帶上塑膠手套,以免操作時汙染。 2. 以pipette 吸取50 μl貓的血液。 3. 將50 μl貓的血液注入一空的離心管。 4. 以pipette 吸取500 μl TE buffer。 5. 將500μl TE buffer注入含50μl貓血液的離心管中。 6. 將此離心管與另一平衡用離心管放入離心機，以12000rpm離心一分鐘。 7. 將離心管拿出檢視沉澱物大小，再將此離心管與另一平衡用離心管放入離心機，以12000rpm離心一分鐘。 8. 取出離心管，將TE buffer液體部份小心以pipette吸出，只留下底部的沉積物。 9. 將500 μl TE buffer注入含沉積物的離心管中。 放到震盪器上震盪，使沉積物再次分散到TE buffer之中。 11. 將此離心管與另一平衡用離心管放入離心機，以12000rpm離心一分鐘。 12. 將離心管拿出，再次將其TE buffer液體部分以pipette吸出，留下底部的沉 積物。 13. 將500 μl TE buffer注入含沉積物的離心管中。 14. 放到震盪器上震盪,使沉積物再次分散到TE buffer之中。 15. 將此離心管與另一平衡用離心管放入離心機，以12000rpm離心一分鐘。 16. 將離心管拿出，再次將其TE buffer液體部分以pipette吸出，留下底部的沉 積物。 17. 放到震盪器上震盪,使沉積物再次分散到TE buffer之中。 18. 將此離心管與另一平衡用離心管放入離心機,以12000 rpm離心一分??。 19. 將離心管拿出，再次將其TE buffer液體部分以pipette吸出，留下底部的沉 積物。 20. 以pipette吸取100 μl DNA lyses buffer，並注入含沉積物的離心管中，並 反覆沖提使沉積物分散。 21. 將離心管管口處裝上cap之後，放入boat,再將boat放入55℃水浴槽中水浴 1小時。 22. 水浴後將離心管放到電磁爐上的注滿水的水盆裡的試管架中，以96℃水浴10分鐘。