2.2.尿素上课2.pptVIP

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数;一、课题背景;二、研究思路 ;固体培养基;天然培养基;基础培养基;※几种选择培养基;根据这一思路，你能否将土壤中分解 尿素的细菌分离出来，说说你的思路。; ;（一）筛选菌株;1、利用尿素作为唯一氮源的培养基 分离出的微生物 ①只是一种细菌吗？ ②都是能分解尿素的微生物吗？;不一定。因为有些微生物可以利用 其他微生物的代谢产物进行生长繁殖。 还有固氮微生物。;2、请你提供一种方法，判断分解 尿素的细菌确实能将尿素分解成氨。;3、要验证以尿素为唯一氮源的培养基 对土壤中的细菌确实具有选择作用，你 该如何设计实验。;思考2： 统计每克土壤样品中 究竟含有多少这样的细菌？;1.稀释涂布平板法（活菌计数法） ⑴原理：当样品稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中含有多少活菌。（即一个菌落代表原先的一个单细胞。）;例：两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果。 1、甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230。 2、乙同学在该浓度下涂布了A、B、C三个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学以这三个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。 你认为这两位同学的作法正确吗？如果有问题，错在哪？; ;2、显微镜直接计数;讨论;设置对照的主要目的是排除实验组中 对实验结果的影响，提高实验结果的 。为了排除培养基是否被杂菌污染了，需培养 的培养基作为空白对照。 ;小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。;谢谢合作！;二、实验设计 ㈠.土壤取样 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。 ◆取土样用的小铁铲和盛土样的信封在使用前都要灭菌。; 准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为对照，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。;（三） 样品的稀释;分离不同的微生物采用不同的稀释度，其原因是 ，其目的是保证获得 的平板。 细菌稀释度一般为 ， 放线菌稀释度为 ， 真菌稀释度为 。;　　　为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？ ;㈣.取样涂布;计算公式：;㈤.微生物的培养与观察; 将涂布好的培养皿放在30 ℃温度下培养。随着培养时间的延长，会有不同的菌落产生。 比较牛肉膏培养基和选择培养基中菌落的数量、形态等，并做好记录。 ; 在一定的培养条件下（相同的培养基、温度及培养时间），同种微生物表现出相同而稳定的菌落特征。这些特征包括菌落的形状、大小、隆起程度和颜色等方面; 关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。 ; 关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。 ; 关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。 ; 关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。 ;〖思考〗在研究未知微生物时务必规范操作，以防被 感染，实验后一定要洗手。;四.结果分析与评价 1.通过对照实验，若培养物有杂菌污染，菌落数偏高；若培养物混入其他氮源，则菌落形态多样，菌落数偏高，难以选择出分解尿素的微生物。 2.提示：选择每个平板上长有30—300个菌落的稀释倍数计算每克样品的菌数最合适。同一稀释倍数的三个重复的菌落数不能相差悬殊，如相差较大，表示实验不精确。;40;41;五 课题延伸;五 课题延伸;五 课题延伸;五 课题延伸;五 课题延伸;五 课题延伸;请根据以上配方，回答下列问题： (1)该培养基含有微生物所需要的_____类营养 物质。其中最主要的碳源是________，氮源是 ______。 (2)该培养基按物理性质划分是_