小鼠精原细胞体外培养分化的研究.pdfVIP

第 ??卷 第 ?期? 实 验 动 物 科 学? ???．??? ??．?? ????年 ?月? ?????????????????????????? ??????????? 驴研《》? 《蠹》著《》? 小 鼠精 原 细 胞 体 外 培 养 分 化 的研 究? 杨丹彤? 杨晓梅? 邱? 毅? 贾颐舫? ??．山东 省 优 生 技 术 重 点 实 验 室 山 东 省 计 划 生 育 科 研 所 ，济 南 ?????????．山 东 大 学 生命 科 学 学 院 ，济 南 ???????? 摘要 ：目的 探讨 小 鼠精原细胞 的分离 纯化 及体外培养条件 。方法? 采 用组合 酶消化法 分离纯化 小 鼠精原 细胞和? 支持 细胞 ，在添 加 ????和 ??的基本 培养基 中进行体外培 养。采用反 转录 ???方法 检测精 子细胞特 异性基 因过? 渡蛋 白 ???????的 表 达 以 对 分 化 细 胞 进 行 鉴 定 。结 果 培 养 ???后 有 分 化 的 圆形 精 子 细 胞 出 现 ，培 养 ??后 收 集 的? 细 胞 可 见 ????基 因 表 达 。结 论 通 过 体 外 培 养 小 鼠精 原 细胞 可迅 速 完 成 减 数 分 裂 过 程 和 减 数 分 裂 后 的 分 化 过 程 ，? 并 可 获 得 更 接 近 成 熟 阶段 的 精 子 细 胞 。? 关 键 词 ：小 鼠 ；精 原 细胞 ；体 外 培 养 ；????? 中 图 分 类 号 ：????．?? 文 献 标 识 码 ：?? 文章 编 号 ：????— ????????????????????? 哺 乳动 物 的精 子发 生过 程十 分 复杂 ，受到 神经 、? ?．?．? 试 剂 ：实 验 中使 用 的主要 试 剂有 ：胶 原 酶 Ⅳ 、? 内分 泌 、生精 细胞 与体 细 胞 相 互 作 用 等 众 多 因素 的? 胰 蛋 白 酶 、睾 酮 ??????，美 国 ?；????／???? 调 节¨?，其机 理 至今 尚未 阐明 。在 体 外 研 究 哺 乳 动? ????????，美 国 ?；胎 牛血 清 ?四季青 公 司 ，杭 州 ?；总? 物精 子 发生 已有 ??多年 的历 史 。近 年来 ，研究 者 们? ??? 提 取试 剂 ??????、???? 第 一 链 合 成 试 剂 盒 、? 在体 外 诱导 生精 细 胞发 生减 数分 裂 及减数 分 裂后 分? ???酶 ????????，北 京 ?；其 它 试 剂 均 为 国 产 分 析? 化 上做 了大量 工作 ，初 级精 母 细胞 在 体 外 培 养 已能? 纯 。引物 合成 由上 海生 工生 物 工程公 司提供 。? 经 减数 分 裂分化 到精 子 细 胞 阶段 ，并 有 临床 应 用 研? ?．?? 方 法? 究 报道 ，将 生精 阻 滞 患 者 的初 级 精母 细胞 在 体 外 培? ?．?．? 细胞 分 离纯 化 ：取 ?～?日龄雄 性小 白 鼠 ，颈? 养 分化 ，用 分化 得 到 的 精 子 细 胞 进行 卵胞 质 内显 微? 椎脱 臼法 处 死 ，在 超 净 工 作 台 中 ，以 ??％ 乙 醇 腹 部? 注射 ，并 成功 妊娠? 。随 着辅 助 生殖 技 术 的发 展 ，? 皮肤 消毒 后 ，迅 速 切 开 阴囊 取 出