FT4操作规程.doc

血清游离甲状腺素(FT4)诊断试剂盒 时间分辨免疫荧光分析法 标准操作规程 文件编号编写者审核者批准者 医院 医院： 科： 室：血清游离甲状腺素(FT4)诊断试剂盒 时间分辨免疫荧光分析法 标准操作规程版本： 执行日期： 共3 页 第 1 页 1.原理 本试剂盒采用包被抗原的竞争免疫分析法。T4-蛋白复合物包被于96孔荧免板，校准品或样品中的T4与固相表面T4竞争结合限量的Eu3+标记抗T4单克隆抗体。洗涤分离后, 微孔表面免疫复合物中的Eu3+被荧光增强液解离后形成稳定的荧光配合物，荧光强度与校准品或样品中的FT4浓度呈负相关，通过校准曲线可得出样品中FT4浓度。 2.样本处理 静脉取血，待血凝结后离心取血清，血清样本可于2～8℃保存一周。不要使用血浆或有严重溶血的血清。 3.试剂 本科室使用苏州新波生物技术有限公司血清游离甲状腺素(FT4)时间分辨荧光免疫法诊断试剂盒，试剂盒主要组分如下： 包被有T4-蛋白复合物的96孔板：一块（12孔×8） 铕（Eu3+）标记的抗T4单克隆抗体（铕标记）：一瓶,1.0ml 校准品（A、B、C、D、E、F）：一套,1.0ml/瓶（冻干品） 浓缩洗液：一瓶,40ml 荧光增强液：一瓶,30ml 分析缓冲液：一瓶,40ml 吸头：20支 说明书：一份 医院： 科： 室血清游离甲状腺素(FT4)诊断试剂盒 时间分辨免疫荧光分析法 标准操作规程版本： 执行日期： 共 3 页 第 2 页 4.仪器（用户自备） 时间分辨荧光分析仪； 微孔洗涤机； 微孔振荡器； 5.操作步骤 5.1. 试剂的准备 ⑴洗涤液：将40ml浓缩洗液和960ml去离子水在干净的洗液瓶中混合，作为工作洗涤液。 ⑵加入1.0ml蒸馏水于各冻干校准品小瓶中，待校准品充分溶解(至少静置30分钟)。 ⑶将分析缓冲液、校准品、待测样品和所需数量的微孔反应条平衡至室温（20～25℃）。 ⑷使用前一小时内，按照需要用量以分析缓冲液稀释铕标记（1:100）（详见操作流程图） 5.2．吸取25μl校准品和待测样品，加入反应板微孔内。 5.3．在各微孔内加入150μl已稀释的铕标记溶液，在室温（20～25℃）下慢速振动1小时。 5.4．洗板6次。将板条在洁净无尘的吸水纸上拍干。 5.5．在每个微孔内加入150μl增强液，于慢档振板5分钟。 5.6. 确定微孔反应板已固定在时间分辨荧光测定仪上，开始检测。 6.计算 结果测定： 用新波公司ANYTEST2000时间分辨荧光测定仪或WALLAC公司时间分辨荧光测定仪（1230、1234、1420,等）测量 7．临床意义 血液循环中的T4大部分与蛋白质结合，只有约0.03%呈游离状态。游离T4（FT4）与总T4在血液中浓度保持相对恒定，以维持其正常的生理功能；因此，FT4的浓度高低能较准确地反应甲状腺功能状态，并且不受血液中甲状腺激素结合蛋白浓度及结合力改变的影响。 甲状腺机能亢进和甲状腺机能减退一般分别引起血清FT4浓度的升高和降低。甲状腺激素不敏感综合症、低T3综合症、药物和某些非甲状腺疾病可能引起FT4浓度升高；而慢性活动性肝炎、原发肝汁性肝硬化等可能引起FT4浓度降低。  医院： 科： 室血清游离甲状腺素(FT4)诊断试剂盒 时间分辨荧光免疫分析法 标准操作规程版本： 执行日期： 共 3 页 第 3 页 8．参考值 本试剂盒FT4浓度正常值范围为6.6～24.8pmol/L。建议各实验室建立自己的正常值范围。 9．注意事项 理解说明书，不要混用不同批号的试剂，不要使用过期的试剂。 尽量建立一个干净无尘的实验室环境，对实验的成功起到决定性作用。(因为尘土中含有很多金属离子，会影响实验结果)。 试剂盒与被测样本使用前必须达到室温。 振荡器按照《2510变频振荡器标准操作规程》设定需要的振荡频率。 微孔洗涤机按照《Egate2310全自动微孔洗涤机标准操作规程》在每天使用前应进行校正注液量和残自量，注意管道是否畅通。洗涤时，确认每孔必须是干的，洗涤液都注满微孔。洗涤后，每个孔必须是干的，如果仍有水则需拍干。 吸取增强液和铕标记物时，请使用干净的吸头，避免尘土等不必要的污染。加增强液时探头应悬空，避免碰到小孔边缘或其中试剂。 使用医用蒸馏水或去离子水配制洗液。 宜用干净的一次性容器配制铕标记物，应避免铕标记稀释液进入标记物原液中。 封片不能重复使用。 如需稀释标本，请用小牛血清稀释。 所有的样本和本试剂盒应作为潜在的传染原看待，按传染病实验室检查规程操作。 如对实验结果有疑问，应重复试验。 为保证实验的准确性，处理后得到的血样应不含纤维蛋白、红细胞、血脂等，并