pSIMPLE-18 EcoR V BAP Vector.pdf

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pSIMPLE-18 EcoR V BAP Vector

TaKaRa Code:D105A pSIMPLE-18 EcoR V/BAP Vector 说明书 宝生物工程(大连)有限公司 目 录 内 容 Page ●制品说明 1 ●制品内容 1 ●保 存 1 ●纯 度 1 ●用 途 1 ●pSIMPLE-18 EcoR V/BAP Vector 的结构 2 ●实验操作 2 ■Control DNA 片段的克隆实验 2 ■一般 DNA 片段的克隆实验 3 ●相关说明 4 ●使用注意 4 ●QA 5 ●制品说明 pSIMPLE-18 EcoR V/BAP Vector 是一种高效克隆末端平滑 PCR 产物的专用载体。本载体由 pUC18 载 体改建而成,它消除了pUC18 载体上的多克隆酶切位点,再在多克隆酶切位点处导入了 EcoR V 酶切位点, 使用 EcoR V 将其切成末端平滑的线性 DNA 后,进行了 5’末端的去磷酸化处理,以避免克隆 DNA 片段 时产生大量载体自连现象。 本载体尽管消除了 LacZ 基因上的多克隆酶切位点,但不影响 β-半乳糖苷酶的正常表达,PCR 扩增片段克 隆于载体后仍可以利用 α-互补性进行蓝白菌落的筛选,挑选阳性克隆。 有很多高保真 DNA 聚合酶,如:TaKaRa Pyrobest、KOD、Pfx、Pfu 等,其扩增的 DNA 片段为平滑末 端,可以方便使用本载体进行 DNA 克隆。由于本载体的 5’末端进行了去磷酸化处理,如果 PCR 扩增片 段的 5’末端不带磷酸基团时,应对其进行5’末端磷酸化(可使用TaKaRa DNA Kination Kit,TaKaRa Code:D402)处理后再使用本载体进行 DNA 克隆。 由于本载体上消除了多克隆酶切位点,当 PCR 产物使用本载体

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