葡萄球菌和链球菌的微生物学检查..docVIP

青 岛 农 业 大 学 兽 医微 生 物 实 验 报 告 题 目： 葡萄球菌和链球菌的分离鉴定 姓 名： 阿芳 学 院： 动物科技学院 专 业： 动物科学 班 级： 201X级X班 学 号： （201XXXXX） 指导教师： 任慧英 完成日期 2014年3月22日 葡萄球菌和链球菌的分离鉴定 摘要 目的：对实验提供的A、B两种细菌进行分离鉴定。 主要方法：通过对细菌的分离培养，形态的观察以及生化反应的现象等方法进行鉴定。 关键词：葡萄球菌；链球菌；分离鉴定 引言 源自李一经.兽医微生物学【M】.北京：高等教育出版社，2011，第五章 病原球菌。 葡萄球菌是一群革兰氏阳性球菌，因常堆聚成葡萄串状，故名。多数为非致病菌，少数可导致疾病。葡萄球菌是最常见的化脓性球菌。无鞭毛，无荚膜，不产生芽胞，营养要求不高，在普通培养基上生长良好，在含有血液和葡萄糖的培养基中生长更佳，需氧或兼性厌氧，少数专性厌氧。28～38℃均能生长，致病菌最适温度为37℃，PH为4.5～9.8，最适为7.4。在琼脂平板上形成圆形凸起，边缘整齐，表面光滑，湿润，不透明的菌落。葡萄球菌在血琼脂平板上形成的菌落较大，有的菌株菌落周围形成明显的完全透明溶血环（β溶血），也有不发生溶血者。多数葡萄球菌能分解葡萄糖、麦芽糖和蔗糖，产酸不产生气。致病性菌株能分解甘露醇。葡萄球菌在自然界中分布很广，健康禽类的皮肤、羽毛、眼睑、粘膜、肠道等都有葡萄球菌存在。 链球菌是化脓性球菌的另一类常见的细菌，常排列成链状，无芽胞，无鞭毛，有菌毛样结构，革兰氏染色阳性。需氧或兼性厌氧，有些为厌氧菌。营养要求较高。普通培养基中需加有血液、血清、葡萄糖等才能生长。最适温度37℃，最适PH7.4～7.6，血琼脂平板上形成灰白色、有乳光、表面光滑、边缘整齐、直径0.5—0.75mm的细小菌落，不同菌株有不同溶血现象。根据在血琼脂培养基上的溶血特征可分为三种不同类型：α型溶血性链球菌又称草绿色链球菌，菌落周围出现草绿色溶血环，致病力弱。β型溶血性链球菌产生强烈的溶血毒素，在血琼脂培养基上，可使菌落周围出现宽2～4毫米、界限分明、无色透明的溶血环，致病力强。γ型链球菌不溶血。能发酵简单的糖类，产酸不产气。链球菌与葡萄球菌不同，不产生过氧化氢酶。广泛分布于自然界和人及动物粪便和健康人鼻咽部，大多数不致病。 1 材料与方法 1.1 材料 两种未知的细菌分别为A菌、B菌。 1.2培养基 1.2.1普通琼脂培养基的制作 称量：牛肉膏 1克、蛋白胨 2克、NaCl 1克、蒸馏水?200毫升于烧杯中。 溶解：搅动，加热溶解。 调节pH值：用NaOH溶液或HCl溶液来进行调节。调pH?为7.5。 分装：将制好的培养基分装入烧瓶或试管内，塞上瓶塞，用牛皮纸包扎瓶口。在121℃高压蒸汽灭菌20～30min即成。 制作平板:将刚刚灭过菌的盛有培养基的锥形瓶和培养皿放在实验台上，点燃酒精灯，右手托起锥形瓶瓶底，左手拔下瓶塞，将瓶口在酒精灯上稍加灼烧，左手打开培养皿盖，右手迅速将培养基倒入培养皿中，每皿约倒入3mm厚度。铺放培养基后放置15分钟左右，待培养基凝固后，即可接种。 1.2.2血琼脂培养基的制作 （1）兔子心脏取血：取一只兔子，找到心跳最快的位置，先用碘酒棉擦，再用酒精棉擦。垂直于兔子的心脏将已有0.5ml柠檬酸钠溶液的一次性针管插入，抽取血液到5ml处。 （2）制作血平板：按照1.2.1的方法制作普通琼脂培养液，至不烫手后，向装有普通琼脂培养液的锥形瓶里注入3ml,混合均匀。将刚刚灭过菌的盛有培养基的锥形瓶和培养皿放在实验台上，点燃酒精灯，右手托起锥形瓶瓶底，左手拔下瓶塞，将瓶口在酒精灯上稍加灼烧，左手打开培养皿盖，右手迅速将培养基倒入培养皿中，每皿约倒入3mm厚度。铺放培养基后放置15分钟左右，待培养基凝固后，即可接种。 1.3细菌的划线分离 1.3.1平板的用途 （1）供分离划线；分离划线的目的是为了得到单个菌落，以备进一步鉴定。（2）扩大培养，得到更多的菌苔。 1.3.2无菌操作? 培养基经高压灭菌后，用经过灭菌的工具（如接种环等）在无菌条件下接种含菌材料（如样品菌）于培养基上。 1.3.3分区划线 四个方向用接种环蛇形分区划线，每划一次之前都要先用酒精灯灭菌，且操作要