高效液相色谱的特点与仪器讲述.pptVIP

第二章高效液相色谱法 一、高效液相色谱仪 instrument of HPLC 二、高效液相色谱法的特点 feature of HPLC 三、流程及主要部件 general process and main assembly of HPLC 第一节高效液相色谱的特点与仪器 high performance liquid chromatograph feature and instrument of HPLC 一、液相色谱仪器（ high performance liquid chromatograph） 1. 分离效能高 GC 分离效能较高，n=103塔板/米，HPLC 可达到 5×103~3×104 塔板/米，可使用较短的柱子。 二、高效液相色谱法的特点 2. 选择性高 HPLC 柱效高，流动相可以控制和改善分离的选择性。 3. 检测灵敏度高 HPLC广泛采用高灵敏度检测器，如UV（10-9 g/mL），荧光检测器（10-11g/mL）。 HPLC的优点 2017-4-11 4.分析速度快 HPLC 载液流速可达1~10ml/min，完成一个样品分析仅需几分钟到几十分钟。 5.应用范围广 HPLC 法不受样品沸点、挥发度和热稳定性限制，适于分析生物大分子、离子型化合物、不稳定的天然物及各种高分子化合物。原则上相对分子量大于400 的有机物都可用 HPLC 法分析。 分析成本高，宜引起污染。 缺少高灵敏度的通用型检测器。 不能替代GC完成沸程范围宽的石油产品的分析。 操作较GC复杂。 HPLC的局限性 实际应用中，凡是能用GC分析的样品一般不用HPLC，因为GC更快，更灵敏，更方便，且耗费较低 。 HPLC与GC比较 气相色谱 高效液相色谱 只能分析挥发性物质 几乎可分析各种物质 不能用于热不稳定物质的分析 可用于热不稳定物质的分析 毛细管色谱可得到很高的柱效 色谱柱不能很长、柱效不会很高 有很灵敏检测器和较灵敏的通用检测器 没有较灵敏的通用检测器 流动相为气体，无毒、易于处理 流动相有毒、费用较高 运行和操作容易 运行和操作较气相难 仪器制造难度较小 仪器制造难度较大 2017-4-11 三、流程及主要部件 　　 　　高效液相色谱仪的主要部件： 　　储液罐、高压输液泵、进样装置、色谱柱、检测器、记录仪和数据处理装置。 工作流程 2017-4-11 一、储液罐及流动相的脱气 1.　储液罐 溶剂在放人储液罐之前必须经过0.45μm滤膜过滤：除去溶剂中的机械杂质，以防输液管道或进样阀产生阻塞现象。 储液罐的材料应耐腐蚀 ：常用玻璃、氟塑料或PEEK塑料 ，容积约为0.5~2.0L。 储液罐放置位置要高于泵体：以保持一定的输液静压差。 使用过程储液罐应密闭：防溶剂蒸发引起流动相组成变化，还可防止空气中O2、CO2重新溶于已脱气的流动相中。 2017-4-11 2．流动相脱气 除去其中溶解气体，防止流动相由柱流至检测器时，因压力降低而产生气泡，而增加基线噪声。 使用荧光检测器，溶解在流动相中的氧气，会造成荧光猝灭。 还会导致样品中某些组分被氧化或会使柱中固定相发生降解而改变柱的分离性能。 流动相在使用前必须进行脱气处理 2017-4-11 吹氦脱气法，在0.1MPa下，以约60mL/min流速通入流动相10~15min。此法适用于所有的溶剂，脱气效果较好，但价格较贵。 加热回流法，此法的脱气效果较好 。 抽真空脱气法，用微型真空泵除去溶解气体，降压至0.05~0.70MPa。 超声波脱气法，流动相置放于超声波清洗器中，用超声波振荡10~15min。脱气效果最差。 在线真空脱气法，真空脱气装置串接到储液系统中，使流动相进入输液泵前连续真空脱气。此法脱气效果最好，适于多元溶剂体系 。 常用的脱气方法 2017-4-11 2017-4-11 二、高压输液泵 1. 高压泵性能 有足够的输出压力：压力范围250~400kg/cm2。 输出流量恒定：流量精密度应在1%，无脉动。 流量范围宽：分析仪器应在0.1 ~10.0ml/min。 制备仪器1~100ml/min。 抗溶剂的腐蚀：常用不锈钢和PEEK塑料。 泵死体积要小；以便迅速更换溶剂和梯度洗提。 2017-4-11 　2. 高压泵分类： 恒流泵：输出流量恒定，与柱引起阻力无关。 恒压泵：输出压力恒定，与柱引起阻力无关。 (1) 恒流泵：常用往复式柱塞泵和注射泵。 特点：流量恒定，液腔体积小（0.1ml），更换溶剂和梯度洗提方便，但有脉动，应用广泛。 2017-4-11 2017-4-11 (2) 恒压泵：常用气动泵 根据压力传导原理设计的，即 P1.SA=