探讨慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞表面共刺激分子的表达变化及临床意义.docVIP

探讨慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞表面共刺激分子的表达变化及临床意义 　　摘要：目的 探讨慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞表面共刺激分子的表达变化及临床意义。方法 选取南昌大学第一附属医院收治的慢性乙型肝炎患者40例作为观察组，所有患者均予以外周血T淋巴细胞表面CD4*、CD8*、CD4*/CD8*比值、CTLA-4等共刺激分子的表达变化测定，同时选取健康患者39例作为对照组，统计两组患者的测定结果。结果 观察组中治疗组、治疗无效组、治疗有效组CD4*、CD8*T淋巴细胞亚群绝对表达量均明显下降，低于对照组 （P0.05）；CD8*T淋巴细胞亚群相对表达量明显高于对照组（P0.05），另外未治疗组、治疗无效组CD4*/CD8*比值明显高于治疗有效组、对照组（P0.05）。结论 进行共刺激分子表达变化研究可以为慢性乙型肝炎治疗提供一定的依据，为深入评价细胞免疫功能提供了新的研究角度。 　　关键词：慢性乙型肝炎；外周血；T淋巴细胞；共刺激分子；表达变化 　　慢性乙型肝炎源于机体细胞免疫功能紊乱，不能有效清除体内病毒，其中T淋巴细胞在主导机体免疫功能方面发挥着重要的作用[1]。笔者主要探讨慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞表面共刺激分子的表达变化及临床意义，将结果报告如下： 　　1 资料与方法 　　1.1一般资料 本次选取的40例研究对象均为南昌大学第一附属医院于2013年4月～2015年1月收治的慢性乙型肝炎患者作为观察组，所有患者均知情同意，其中男29例，女11例，年龄37～68岁，平均年龄（45.3±5.6）岁；职业：教师16例、农民工4例、企业高管8例、退休在家12例。所有患者经检查，均符合慢性乙型肝炎的诊断标准，排除神经系统障碍、严重心脑血管疾病、全身免疫系统疾病、凝血及造血功能障碍、甲型肝炎、丙型肝炎、丁型肝炎等患者。同时选取健康患者39例作为对照组，其中男30例，女9例，年龄36～69岁，平均年龄（45.8±5.7）岁；职业：教师15例、农民工5例、企业高管9例、退休在家11例。两组患者在性别、年龄等资料方面无显著差异（P0.05），具有可比性。 　　1.2方法 　　1.2.1试剂 在测定过程中，需要用到的试剂：鼠抗人CD3-APC、CD8-FIT、CTLA-4-PE、PD-1-PE荧光素标记单克隆抗体，LgG-FITC、lgG-PE、lgG-APC同型对照融血剂，由美国BD公司提供；另外需要乙型肝炎病毒及耐药突变检测试剂盒、HBV标志物检测试剂盒、ALT检测试剂盒。 　　1.2.2仪器 流式细胞仪、扩增仪、高速冷冻离心机、全自动生化分析仪、全自动酶免分析仪、低温冰箱。 　　1.2.3测定 外周血T淋巴细胞表面共刺激分子检测具体方法：患者晨起空腹抽取外周静脉血3 ml，抗凝混匀后分别置于5支不同的测定管中：其中第一管加入CD3、CD8、CD28，第二管中加入单抗CD3、CD8、CTLA-4，第三管中加入CD3、CD8、PD-1，第四管中加入单抗CD3、CD8、Tim-3，第五管中加入lgG-FTTC lgG-PE lgG-APC作为同型对照管，所有试管中均加入单抗20 μl，摇匀后在常温下状态下放置30 min，然后加入新鲜配置的溶血剂摇匀，在光线暗处放置15 min并离心5 min，使用磷酸盐缓冲液进行3次洗涤，并且每管中加入0.3 ml PBS，在4°C中放置后在1 d内检测。为了使结果更加精准，辅助测定方法：并采用定时荧光定量PCR检测技术测定血清中HBV（乙型肝炎病毒）、DNA（脱氧核糖核酸）含量；采用双抗体夹心时间分辨荧光免疫分析法检测乙型肝炎病毒；采用全自动生化分析仪监测丙氨酸转氨酶含量。 　　1.3观察指标 将观察组分为为治疗组、治疗无效组、治疗有效组，与对照组作比较。分析两组患者外周血T淋巴细胞亚群相对表达量[2]。分析两组患者外周血T淋巴细胞亚群绝对表达量[3]。 　　1.4统计学方法 采用SSPS 20.0软件进行数据的处理与分析，表示计量数据资料，采用t检验，（%）表示计数资料，并进行χ2检验，P0.05，具有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1患者外周血T淋巴细胞亚群相对表达量分析 观察组三组CD4*、CD8*T淋巴细胞亚群绝对表达量均明显下降，低于对照组 （P0.05），见表1。 　　2.2患者外周血T淋巴细胞亚群绝对表达量分析 CD8*T淋巴细胞亚群绝对表达量明显高于对照组。另外未治疗组、治疗无效组CD4*/CD8*比值明显高于治疗有效组、对照组（P0.05），见表2。 　　3 讨论 　　与对照组相比较，观察组CD4*、CD8*等表达量出现明显下降，另外未治疗组CD4*、PD-1*表达量明显高于对照组、治疗有效组、治疗无效组。总体而言，观察组CD4*