巨细胞病毒感染的检测及其研究进展.docVIP

巨细胞病毒感染的检测及其研究进展 　　临床上常规的巨细胞病毒（cytomegalovirus，CMV）检测目前多数都是孕早期的TORCH四项或五项筛查，通过酶联免疫法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）或免疫荧光法（immunofluorescence assay，IFA）检测血清中的IgG、IgM抗体。人巨细胞病毒（Human cytomegalovirus，HCMV）感染可造成孕妇的宫内感染并引起母婴间的传播感染，表现为胎儿的流产、畸形、死胎、早产或新生儿的身心缺陷和器官功能的发育异常等，因此，开展巨细胞病毒检测对于优生尤为重要，但实际检测效果及临床意义却不尽如人意，国内外学者对是否应进行这种筛查或是否应将TORCH项目全部检测出现了许多不同的观点，现就巨细胞病毒检测及其进展做一综述。 　　1巨细胞病毒现状 　　人巨细胞病毒（Human cytomegalovirus，HCMV）是疱疹病毒科B亚科的一种，巨细胞病毒含有约235 kb，与其他疱疹病毒比较而言是其中最大的一种[1]。人群中HCMV的感染率很高，在欧美等发达国家HCMV的感染率约为60%；而在发展中国家或在社会经济较低的团体及某些特殊的人群中，HCMV的抗体检出率约50%～80%[2，3]。HCMV在自然界中广泛存在，人是它的唯一宿主，正常人群中的自然感染也非常普遍。HCMV一旦感染可在体内长期潜伏。孕期妇女的HMCV感染是引发宫内感染，造成胎儿损害的最常见病原体，HCMV感染可以影响胎儿神经系统的发育，是引发智力迟钝的重要原因之一，仅次于唐氏综合征，研究发现先天性耳聋患者中是有一半是巨细胞病毒感染引起的，且原发性感染较继发性感染，其对胎儿的损害及引发的临床症状更为严重。在正常健康人中可引起单核细胞增多症；也有学者研究发现，巨细胞病毒感染与人群发生高血压存在相关性[4]。HCMV也是器官移植失败和艾滋病患者并发感染死亡的主要原因之一。对非免疫缺陷者常导致长期隐性感染，甚至引起感染细胞的转化、畸变或癌变等。目前对于HCMV感染的实验室诊断研究主要集中于孕妇的筛查、产前诊断、新生儿的早期诊断、患者免疫状态评价及器官移植受者感染的检测等。 　　2巨细胞病毒的免疫原性物质 　　HcMV呈球形，直径约200nm，由核心DNA、衣壳、被膜和包膜等几部分组成.基因全长约为240kb，由一个短的单一序列US和一个长的单一序列UL，以及二者之间和两端的重复序列组成，可编码200多种蛋白质，包括超过65种糖蛋白，其中至少有10种包膜糖蛋白. 　　pp65是HCMV被膜蛋白中最主要的一种，主要参与病毒基因调节以及改变宿主细胞的代谢，pp65具有高度的保守性[5]，含有IgM结合表位，对判断急性感染具有重要的意义。Rolf等的实验表明ppl50的495-691aa片段是确诊HCMV既往感染的最适抗原（IgG结合表位），在检测HCMV原发及急性期感染中起着极其重要的作用。 　　gB（glycoproteill B，gB）糖蛋白是其中一种，免疫原性最强，与病毒穿入宿主细胞、在细胞间传播和诱导宿主的免疫应答等密切相关.gB糖蛋白免疫原性强，有多种免疫原性表位，其中包括一些中和抗体结合表位.gB是抗HcMV中和抗体最主要的靶蛋白，40～70%的自然感染人群血清中和抗体针对gB。AD-1是gB免疫优势的中和抗体表位，50%的gB中和抗体针对AD-1 gB[16]。AD-2也是gB的中和抗体表位，但免疫原性弱。 　　gH在病毒膜蛋白中的作用主要是通过与细胞膜上的αγβ3受体结合，该复合物与gB-EGFR共同作用进一步促进病毒囊膜与细胞的融合。gH同样具有三个中和性抗原表位区段，但这些抗原表位区具有明显的病毒株特异性。抗原区段A含有三个表位，区段B含有2个表位，区段AB只有一个表位。抗原区段A中的2个表位和区段B中的一个表位具有多变性，而抗原区段A中的另一个表位和区段B中的另一表位及区段AB的表位具有保守性。 　　gM或gM/gN复合物的中和性作用是最近才研究证实。gN的作用一方面与gM构成复合物在病毒感染过程中产生中和性抗体，另一方面与病毒的复制有关。gM是病毒的第三类膜蛋白，分子量约为42～45kDa，经计算机预测gM蛋白含有7个跨膜区段。在病毒外膜上gM与gN形成异源二聚体而存在。尽管其中和性抗原的性质已经得到确认，但到目前为止有关gM的表位研究还未见报道。 　　3 HCMV抗体检测 　　病毒感染后机体产生体液免疫，特异性IgG、IgM抗体迅速升高，IgG抗体可维持终生，一般在感染后4d产生，IgM抗体，持续6～12w，偶有持续一年之多的报道。目前抗体检测的方法按所用抗原的不同大致分为3类，即基于病毒裂解物抗原、基因工