采用磁珠技术进行高载量，小规模抗体纯化.PDFVIP

应 采用磁珠技术进行高载量，小规模抗体纯化 用 . . Fredrik Borg, Ann Bergh, Stefan D Eriksson, Gunnar Glad, Therese Granér, Anna Gro berg, Helena Hedlund and Ulf Hellberg 园 GE Healthcare Bio-Sciences AB, SE-751 84, Uppsala, Sweden 容量比较 –蛋白G磁珠 地 背景 从血清，腹水以及细胞培养上清中纯化抗体的熟知方 法是利用葡萄球菌蛋白A或链球菌蛋白G与IgG的Fc段的高 亲和力进行纯化 。使 用蛋白A 或蛋白G磁珠 进行抗体纯化正是利 用 了其与抗体高度特 异结合的优点 ，同时 提供 了一种简单 ，易 于操作的工具 ，用于 从ul到ml级别的抗体快 图1.不同蛋白A和蛋白G磁珠对人IgG和兔IgG吸附容量的比较。每根柱条表 速分离。 。 。 示单次纯化所收获的纯IgG的量 NM=未测出 所有的比较实验都选择在通 特点 用医疗集团实验室进行。 表1. 蛋白A Mag SepharoseT M Xtra和蛋白G Mag Sepharos Xtra 的特征 洗脱条件的筛选 （ 基质 含磁铁的高度交联的球形琼脂糖 琼脂糖凝 析因实验设计中对洗脱缓冲液中的pH和NaCl以及精 胶） 氨酸浓度的作用进行研究。研究中的响应为回收率，共开 颗粒大小 37至100 μm 展18个实验。上样量约为24 mg人IgG/ml 沉淀介质。用洗 配体 蛋白A和蛋白G 脱缓冲液洗脱介质3遍 ，残留的蛋白用脱洗缓冲液进行脱 浆浓度 10% 洗。然后对回收率和物料平衡进行计算。 吸附容量 27 mg人IgG/ml 培养基 纯度 90%