ITS鉴定木材种类一例司法鉴定研究实例0710.docVIP

研究报告 Research Report ITS 黄欣2 周倩2 高必达12,* 1湖南农业大学长沙410128; 2湖南农业大学司法鉴定中心, 长沙410128 *通讯作者bdgao@ 摘要：ITS序列分析对待检测的原木做了分子鉴定。实验采用CTAB法提取原木DNA，对提取的原木DNA进行提纯，然后进行ITS rDNA的PCR扩增，再对PCR阳性产物进行克隆、测序，将测序结果进行Blast分析、构建系统发育树等。研究结果表明，送检的47根原木中有9根鉴定为油丹。本研究采用ITS序列系统发育分析方法，成功鉴定了原木种类，为今后类似司法鉴定案件审理提供了可靠的鉴定意见。 关键词： Identification of Plants by ITS Sequencing: A Judicial Case Study Huang Xin2 Zhou Qian2,3 Lei Xianghua2 Gao Bida 1,2,3* 1 College of Plant Proctection, Hunan Agricultural University, Changsha, 410128; 2 Judicial Center of Hunan Agricultural University, Changsha, 410128 Abstract Selecting one judicial identification case of illegal acquisition of Alseodaphne, a plant on the national protection list, as an example, this study,in the premise of feasible identifying technique, conducts a molecular identification on the object logs using ITS sequence analysis. The DNA of the object logs are extracted under the CTAB method and purified, then a PCR expansion of the ITS rDNA is conducted. Afterwards the PCR positive product is cloned and sequenced, on the the results of which a Blast analysis is done and phylogenetic tree construced. The outcome shows that 9 of the 47 submitted logs are Alseodaphne . In this study, the species of the logs are successfully identified using the phylogenetic analysis of ITS sequence fragment which provides a reliable expert opinion for similar forensic identification cases in the future. Keywords: Alseodaphne, ITS sequence, Molecular identification, Judicial identification 木材鉴定技术对于打击非法采伐、保护珍稀濒危种材、合理保护森林资源具有重要意义(姜笑梅等2010)。为了更好地发挥木材鉴定技术在实际生产生活中的作用，近年来木材鉴定技术不断发展，特别是随着分子遗传学的发展，分子标记及DNA条形码技术逐渐成为一种物种辅助鉴定的工具，其在木材鉴定中的作用越来越受到人们的重视。其中ITS序列分析在植物分类鉴定与系统进化中的应用越来越广泛(Finkeldey et al., 2010)。ITS序列之所以在植物种类鉴定及分子系统学中得到广发应用，其主要原因为ITS1、ITS2分别位于18S-5.8S rDNA、5.8S-26S rDNA之间，而18S-5.8S rDNA、5.8S-26S rDNA的序列具有高度保守性，这样就可以用与它们序列互补的通用引物对ITS区进行PCR扩增、测序(赵玥等, 2005)，为进一步的分子鉴定提供良好的实验基础。2012年，湖南农业大学司法鉴定中心应海南省第一中级人民法院委托，对某非法收购国家重点保护植物油丹(Alseodaphne)案中47根原木样本进行司法鉴定。本研究在此应用背景下展开，运用I